【摘要】：研究目的：Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶(Type Ⅱ Transmembrane Serine Proteases, TTSPs)是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶超家族中的一個(gè)亞家族。在結(jié)構(gòu)上,所有的TTSPs都包含個(gè)近氨基端的跨膜區(qū)以及一個(gè)羧基端的蛋白酶區(qū)。TTSPs通過跨膜區(qū)錨定在細(xì)胞膜上,而蛋白酶區(qū)是TTSPs在細(xì)胞膜表面催化蛋白水解的功能活性區(qū)域。TTSP家族的成員包括腸激酶、corin、matriptases 以及 hepsin等,它們參與了許多生理病理過程,比如食物消化、血壓調(diào)節(jié)、鐵代謝、耳蝸發(fā)育等。TTSP s的表達(dá)缺失或缺陷會(huì)引起營養(yǎng)不良、高血壓、缺鐵性貧血以及先天性耳聾等疾病。人類的TTSPs有19個(gè)成員,分為4個(gè)亞組,包括hepsin/TMPRSS組、matriptase組、HAT/DESC組以及corin組。蛋白酶TMPRSS11f (又名HAT-Like 4, HATL4)是HAT/DESC亞組中的一個(gè)成員。我們實(shí)驗(yàn)室最新研究發(fā)現(xiàn),TMPRSS11f在正常人的血細(xì)胞以及骨髓細(xì)胞中不表達(dá),而在急性髓細(xì)胞性白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)細(xì)胞中異常高表達(dá)；并且TMPRSS11f的異常表達(dá)與AML病人的不良臨床預(yù)后有關(guān)。這提示TMPRSS11f可能參與了AML的病理過程。然而,迄今還沒有研究報(bào)道TMPRSS11f的正常生物學(xué)功能。本研究旨在檢測TMPRSS11f在人及小鼠組織中的表達(dá)情況,然后利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建了Tmprss1 1f基因敲除小鼠,并對(duì)其表型進(jìn)行分析。通過對(duì)Tmprss11f基因敲除小鼠的生存能力、生育能力、發(fā)育狀況和血液指標(biāo)等進(jìn)行檢測分析,以了解TMPRSS11f在胚胎發(fā)育、生長和生存、以及血細(xì)胞成熟過程中的生物學(xué)作用。(1)利用免疫組化技術(shù)檢測TMPRSS11f蛋白在人組織中的表達(dá)定位。(2) 利用RT-PCR技術(shù)檢測Tmprss11fmRNA在小鼠組織中的表達(dá)分布。(3)利用免疫組化技術(shù)檢測Tmprss11f蛋白在小鼠組織中的表達(dá)定位。(4) 利用CRISPR/Cas9技術(shù)建立Tmprss11f基因敲除小鼠。(5) 利用RT-PCR技術(shù)從mRNA水平驗(yàn)證TMPRSS11f基因敲除。(6) 分析雜合子間交配得到的新生和斷乳后小鼠基因型比例。(7) 檢測Tmprss11f基因敲除小鼠體重增長及長期生存狀況。(8) 檢測Tmprss11f基因敲除小鼠交配后每胎仔數(shù)。(9) 檢測Tmprss11f基因敲除小鼠血細(xì)胞以及血生化指標(biāo)。(10)利用蘇木素伊紅染色觀察Tmprss11f基因敲除小鼠組織形態(tài)。(11)通過傷口愈合以及游泳實(shí)驗(yàn),分析Tmprss11f基因敲除對(duì)小鼠傷口愈合、皮膚保濕以及體溫調(diào)節(jié)能力的影響。(1) TMPRSS11f表達(dá)于人類及小鼠的氣管、食管、皮膚等組織。(2) TMPRSS11f定位于人類及小鼠表皮組織中的皮脂腺以及氣管的粘膜層等。(3) 表型分析顯示,與野生型小鼠相比,Tmprss11f基因敲除小鼠的生長發(fā)育、生育能力以及組織形態(tài)沒有明顯的區(qū)別。(4) 血常規(guī)、血生化實(shí)驗(yàn)顯示,野生型和Tmprss11f基因敲除小鼠的各指標(biāo)沒有明顯差異。(5) Tmprss11f基因敲除小鼠傷口愈合、皮膚保濕及體溫調(diào)節(jié)的能力未見明顯異常。我們發(fā)現(xiàn)TMPRSS11f廣泛表達(dá)于人類及小鼠的上皮組織中,包括皮膚的皮脂腺、氣管的纖毛以及腺體等。通過對(duì)構(gòu)建的Tmprss1 1f基因敲除小鼠的表型分析,發(fā)現(xiàn)在我們的實(shí)驗(yàn)條件下,Tmprss11f基因的缺失對(duì)小鼠胚胎發(fā)育、生長成熟、生育能力、長期生存、血細(xì)胞生成以及皮膚的功能沒有明顯的影響。Tmprss11f基因敲除小鼠的表型可能需要在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)刺激條件下才能顯示出來。我們構(gòu)建的Tmprss11f基因敲除小鼠可作為進(jìn)一步研究TMPRSS 11f生理和病理功能的一個(gè)重要?jiǎng)游锬Ｐ汀?br/>[Abstract]:The purpose of this study was that Type 鈪，

本文編號(hào)：2501752