【摘要】：研究目的：Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶(Type Ⅱ Transmembrane Serine Proteases, TTSPs)是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶超家族中的一個亞家族。在結構上,所有的TTSPs都包含個近氨基端的跨膜區(qū)以及一個羧基端的蛋白酶區(qū)。TTSPs通過跨膜區(qū)錨定在細胞膜上,而蛋白酶區(qū)是TTSPs在細胞膜表面催化蛋白水解的功能活性區(qū)域。TTSP家族的成員包括腸激酶、corin、matriptases 以及 hepsin等,它們參與了許多生理病理過程,比如食物消化、血壓調節(jié)、鐵代謝、耳蝸發(fā)育等。TTSP s的表達缺失或缺陷會引起營養(yǎng)不良、高血壓、缺鐵性貧血以及先天性耳聾等疾病。人類的TTSPs有19個成員,分為4個亞組,包括hepsin/TMPRSS組、matriptase組、HAT/DESC組以及corin組。蛋白酶TMPRSS11f (又名HAT-Like 4, HATL4)是HAT/DESC亞組中的一個成員。我們實驗室最新研究發(fā)現(xiàn),TMPRSS11f在正常人的血細胞以及骨髓細胞中不表達,而在急性髓細胞性白血病(Acute Myeloid Leukemia, AML)細胞中異常高表達；并且TMPRSS11f的異常表達與AML病人的不良臨床預后有關。這提示TMPRSS11f可能參與了AML的病理過程。然而,迄今還沒有研究報道TMPRSS11f的正常生物學功能。本研究旨在檢測TMPRSS11f在人及小鼠組織中的表達情況,然后利用CRISPR/Cas9技術構建了Tmprss1 1f基因敲除小鼠,并對其表型進行分析。通過對Tmprss11f基因敲除小鼠的生存能力、生育能力、發(fā)育狀況和血液指標等進行檢測分析,以了解TMPRSS11f在胚胎發(fā)育、生長和生存、以及血細胞成熟過程中的生物學作用。(1)利用免疫組化技術檢測TMPRSS11f蛋白在人組織中的表達定位。(2) 利用RT-PCR技術檢測Tmprss11fmRNA在小鼠組織中的表達分布。(3)利用免疫組化技術檢測Tmprss11f蛋白在小鼠組織中的表達定位。(4) 利用CRISPR/Cas9技術建立Tmprss11f基因敲除小鼠。(5) 利用RT-PCR技術從mRNA水平驗證TMPRSS11f基因敲除。(6) 分析雜合子間交配得到的新生和斷乳后小鼠基因型比例。(7) 檢測Tmprss11f基因敲除小鼠體重增長及長期生存狀況。(8) 檢測Tmprss11f基因敲除小鼠交配后每胎仔數(shù)。(9) 檢測Tmprss11f基因敲除小鼠血細胞以及血生化指標。(10)利用蘇木素伊紅染色觀察Tmprss11f基因敲除小鼠組織形態(tài)。(11)通過傷口愈合以及游泳實驗,分析Tmprss11f基因敲除對小鼠傷口愈合、皮膚保濕以及體溫調節(jié)能力的影響。(1) TMPRSS11f表達于人類及小鼠的氣管、食管、皮膚等組織。(2) TMPRSS11f定位于人類及小鼠表皮組織中的皮脂腺以及氣管的粘膜層等。(3) 表型分析顯示,與野生型小鼠相比,Tmprss11f基因敲除小鼠的生長發(fā)育、生育能力以及組織形態(tài)沒有明顯的區(qū)別。(4) 血常規(guī)、血生化實驗顯示,野生型和Tmprss11f基因敲除小鼠的各指標沒有明顯差異。(5) Tmprss11f基因敲除小鼠傷口愈合、皮膚保濕及體溫調節(jié)的能力未見明顯異常。我們發(fā)現(xiàn)TMPRSS11f廣泛表達于人類及小鼠的上皮組織中,包括皮膚的皮脂腺、氣管的纖毛以及腺體等。通過對構建的Tmprss1 1f基因敲除小鼠的表型分析,發(fā)現(xiàn)在我們的實驗條件下,Tmprss11f基因的缺失對小鼠胚胎發(fā)育、生長成熟、生育能力、長期生存、血細胞生成以及皮膚的功能沒有明顯的影響。Tmprss11f基因敲除小鼠的表型可能需要在進一步的實驗刺激條件下才能顯示出來。我們構建的Tmprss11f基因敲除小鼠可作為進一步研究TMPRSS 11f生理和病理功能的一個重要動物模型。
[Abstract]:The purpose of this study was that Type 鈪，

本文編號：2501752