【摘要】：基因敲除是研究基因功能最直接的方法。對于大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli)而言,傳統(tǒng)的基因敲除方法是利用其原有的RecA系統(tǒng),此方法依賴于特定的限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn),且所需同源臂長,操作復(fù)雜。Red同源重組法的出現(xiàn)使得基因組的改造更為快速、簡單,在E.coli基因敲除中的應(yīng)用也愈加廣泛和成熟。作者介紹了Red同源重組系統(tǒng)的組成和同源重組原理,闡述了常用的兩步同源重組法敲除E.coli基因的操作步驟及注意事項(xiàng)。大腸桿菌的兩步法基因敲除技術(shù)已在工程菌改造、病原菌致病機(jī)理、耐藥機(jī)制研究等領(lǐng)域做出巨大貢獻(xiàn),由于兩步法仍保留有Red同源重組系統(tǒng)電轉(zhuǎn)效率低、有序列殘留的缺陷,作者對幾個針對兩步法的經(jīng)典的無痕化改造進(jìn)行了總結(jié)介紹,通過對以上方法及應(yīng)用進(jìn)行綜述,為以大腸桿菌作為工程菌的基因敲除技術(shù)提供參考。
[Abstract]:Gene knockout is the most direct method to study gene function. For E. coli (Escherichia coli,E.coli), the traditional gene knockout method is to use its original RecA system, which depends on the specific restriction endonuclease digestion site and requires the length of homologous arm. The operation is complex. The emergence of Red homologous recombination method makes the transformation of genome more rapid and simple, and its application in E.coli gene knockout is more extensive and mature. This paper introduces the composition and principle of Red homologous recombination system, and expounds the operation steps and matters needing attention of knockout E.coli gene by two-step homologous recombination method. The two-step gene knockout technology of E. coli has made great contributions to the transformation of engineering bacteria, the pathogenic mechanism of pathogenic bacteria and the study of drug resistance mechanism. because the two-step method still retains the low electroconversion efficiency of Red homologous recombination system and the defect of sequence residue, In this paper, several classical scar-free revamping for two-step method are summarized and introduced, and the above methods and applications are reviewed to provide reference for E. coli as gene knockout technology for engineering bacteria.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(KYZ201326) 江蘇省高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目
【分類號】：Q78

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