【摘要】：該研究以Pb~(2+)誘導(dǎo)的苦蕎(Fagopyrum tataricum)葉片轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎(chǔ),通過(guò)RT-PCR克隆,獲得苦蕎植物絡(luò)合素合酶(Phytochelatins,PCs)基因(FtPCS);采用無(wú)縫克隆構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-PCS,并通過(guò)反向-HPLC結(jié)合DTNB[5,5′-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)]柱后衍生的方法,對(duì)純化的FtPCS重組蛋白在Pb~(2+)存在條件下的催化活性進(jìn)行初步分析,為進(jìn)一步揭示FtPCS基因在苦蕎重金屬富集和解毒過(guò)程中的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。結(jié)果表明:苦蕎FtPCS基因組序列全長(zhǎng)5 456bp,包括8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子;FtPCS基因ORF序列全長(zhǎng)1 485bp,編碼494個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量為55.10kDa�？扇苄苑治霰砻�,苦蕎FtPCS基因在E.coli BL21Star(DE3)中以包涵體的形式表達(dá),采用梯度透析復(fù)性并結(jié)合鈷離子螯合層析的方法獲得純化的FtPCS重組蛋白,復(fù)性的FtPCS蛋白具有催化GSH生成PC化合物的活性,而且低濃度的Pb~(2+)對(duì)其催化活性具有激活作用。
[Abstract]:Based on the data of Tartary buckwheat (Fagopyrum tataricum) leaf transcriptional group induced by Pb~ (2), the (FtPCS); gene of Tartary buckwheat plant complex enzyme (Phytochelatins,PCs) was obtained by RT-PCR cloning. The prokaryotic expression vector pET28a-PCS, was constructed by seamless cloning and derivatization was carried out by reverse-HPLC binding DTNB [5, 5] dithiobis (2-nitrobenzoic acid). The catalytic activity of purified FtPCS recombinant protein in the presence of Pb~ (2) was analyzed, which laid a foundation for further revealing the mechanism of FtPCS gene in the process of heavy metal enrichment and detoxification in Tartary buckwheat. The results showed that the full length of Tartary buckwheat FtPCS genome sequence was 5456 BP, including 8 exons and 7 introns, and the ORF sequence of FtPCS gene was 1485 BP, encoding 494 amino acids and predicting molecular weight of 55. 10 KD. Soluble analysis showed that Tartary buckwheat FtPCS gene was expressed in the form of inclusion body in E.coli BL21Star (DE3). The purified FtPCS recombinant protein was obtained by gradient dialysis renaturation and cobalt ion chelating chromatography. The renatured FtPCS protein has the activity of catalytic GSH to PC compound, and low concentration of Pb~ (2) can activate its catalytic activity.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31171606) 西北農(nóng)林科技大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(24520152214)
【分類(lèi)號(hào)】：S517;Q943.2

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本文編號(hào)：2485836