【摘要】：為了解淡水貝類是否存在組織蛋白酶L的亞型及其亞型的免疫相關(guān)作用,本實驗利用已構(gòu)建的池蝶蚌血細(xì)胞全長c DNA文庫,篩選獲得與之同源的EST序列,結(jié)合RACE技術(shù)進(jìn)一步克隆了池蝶蚌一個新的組織蛋白酶L基因的c DNA全長,命名為Hs Cts L1-like基因(Gen Bank登錄號為KF015273)。該序列全長為1280 bp,5′-非翻譯區(qū)(5′UTR)為31 bp,3′-非翻譯區(qū)(3′UTR)為256 bp,開放閱讀框區(qū)(ORF)為993 bp,編碼330個氨基酸,預(yù)測蛋白相對分子量為36.86 ku,理論等電點為6.23。序列分析結(jié)果顯示,Hs Cts L1-like與其他軟體動物相對應(yīng)序列具有共同結(jié)構(gòu)特征,包含信號肽、前肽抑制域和成熟肽三部分,在其他物種中已鑒定的Cts L簽名序列標(biāo)簽(ERF/WNIN、GNFD、GCXGG和QCHN等)在Hs Cts L1-like中均可找到。其氨基酸序列同縊蟶Cts L1(AGL33704.1)同源性最高,達(dá)67%;與報道的三角帆蚌Cts L(ADV03094)和池蝶蚌中另一個Cts L(AEX88474)僅均為52.91%;系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,Hs Cts L1-like與縊蟶、長牡蠣和合浦珠母貝的Cts L1聚為一分支,推測Hs Cts L1-like屬于Cts L家族中的亞型1。實時熒光定量PCR(q RT-PCR)檢測顯示,Hs Cts L1-like m RNA在肝臟中表達(dá)量最高,其次是卵巢和精巢。注射鰻弧菌后,血細(xì)胞和肝臟Hs Cts L1-like m RNA轉(zhuǎn)錄水平顯著升高,暗示其是一個免疫有關(guān)的基因,參與了池蝶蚌的先天免疫應(yīng)答反應(yīng)。
[Abstract]:In order to investigate the immune correlation of cathepsin L subtypes and their subtypes in freshwater shellfish, the constructed full-length c DNA library of blood cells from Hyriopsis cumingii was used to screen the homologous EST sequences. The full length of c DNA of a new cathepsin L gene, named Hs Cts L1-like gene (Gen Bank accession number KF015273, was further cloned by RACE. The full length of the sequence is 1280 bp,5'- untranslated region (5'UTR) 31 bp,3'- untranslated region (3'UTR) 256 bp, open reading frame region (ORF) is 993 bp, encoding 330 amino acids, and the predicted relative molecular weight of the protein is 36.86 ku,. The theoretical isoelectric point is 6.23. The results of sequence analysis showed that, Hs Cts L1-like had common structural characteristics with other molluscs, including signal peptide, propeptide inhibitory domain and mature peptide, and identified Cts L signature sequence tags (ERF/WNIN,) in other species. Both GNFD,GCXGG and QCHN can be found in Hs Cts L1-like. The amino acid sequence of Sinonovacula constricta L 1 (AGL33704.1) had the highest homology with Cts L 1 (AGL33704.1), and only 52.91% with the reported Cts L (ADV03094 and another Cts L (AEX88474). Phylogenetic analysis showed that, Hs Cts L1-like and Cts L _ 1 of Sinonovacula constricta, Oyster longus and Pinctada repellent were one branch, suggesting that Hs Cts L1-like belonged to the subgroup of Cts L family. Real-time fluorescence quantitative PCR (q RT-PCR (real-time fluorescence quantitative RNA) showed that the expression of, Hs Cts L1-like m RNA was the highest in the liver, followed by ovaries and spermatozoa. After injection of Vibrio eel, the transcription level of Hs Cts L1-like m RNA in blood cells and liver increased significantly, suggesting that it is an immune related gene, which is involved in the innate immune response of Hyriopsis cumingii.
【作者單位】： 南昌大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：江西省科技支撐項目(20121BBF60036) 江西省自然科學(xué)基金(20151BAB204035) 江西省教育廳自然科學(xué)青年基金項目(GJJ14219) 江西省科技落地項目(KJLD12001) 國家自然科學(xué)基金(31260282;31260642;31160534)~~
【分類號】：Q78;S917.4

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本文編號：2484685