【摘要】：目的:通過(guò)慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾(RNAi)敲低P34H表達(dá),分析其對(duì)小鼠精子P34H表達(dá)和精子透明質(zhì)酸酶(HYD)活性的影響。方法:構(gòu)建3種附睪精子P34H shRNA慢病毒表達(dá)載體GV-P34H-sh RNA-1、GVP34H-sh RNA-2和GV-P34H-sh RNA-3,提取陽(yáng)性克隆質(zhì)粒測(cè)序,轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,生產(chǎn)慢病毒顆粒。將3種重組慢病毒及陰性對(duì)照病毒分別注入小鼠附睪中,用real-time PCR和Western blot法分別檢測(cè)其對(duì)P34H m RNA和蛋白的沉默效果。采用免疫熒光法觀察P34H蛋白在小鼠精子上的定位,改良透明質(zhì)酸鈉-明膠底物膜法檢測(cè)小鼠精子HYD活性(HYD陽(yáng)性反應(yīng)率和HYD活性強(qiáng)度)。結(jié)果:測(cè)序結(jié)果證實(shí)3種慢病毒載體均包裝成功。感染小鼠附睪后,P34H的mRNA及蛋白表達(dá)量均較陰性感染組和正常對(duì)照組明顯降低(P0.05);其中以GV-P34H-sh RNA-1作用最為顯著,精子P34H陽(yáng)性表達(dá)率和HYD活性均較陰性感染組和正常對(duì)照組明顯降低(P0.05),而陰性感染組和正常對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)論:附睪P34H基因沉默可抑制小鼠附睪中精子P34H陽(yáng)性表達(dá)率和HYD活性。
[Abstract]:Aim: to analyze the effect of lentivirus mediated RNA interference on P34H expression and hyaluronidase (HYD) activity in mouse spermatozoa. Methods: three kinds of epididymal sperm P34H shRNA lentivirus expression vectors GV-P34H-sh RNA-1,GVP34H-sh RNA-2 and GV-P34H-sh RNA-3, were constructed and sequenced and transformed into HEK293T cells to produce lentivirus particles. Three recombinant lentiviruses and negative control viruses were injected into the epididymis of mice, and their silencing effects on P34H m RNA and protein were detected by real-time PCR and Western blot, respectively. The localization of P34H protein on mouse spermatozoa was observed by immunofluorescence method. The HYD activity (HYD positive rate and HYD activity intensity) of mouse spermatozoa were detected by modified sodium hyaluronate gelatin substrate membrane method. Results: sequencing results confirmed that all three lentivirus vectors were packaged successfully. The expression of mRNA and protein of P34H in epididymis of infected mice was significantly lower than that of negative infection group and normal control group (P 0.05). The positive expression rate of P34H and the activity of HYD in spermatozoa were significantly lower than those in the negative infection group and the normal control group (P 0.05), but there was no significant difference between the negative infection group and the normal control group. Conclusion: P34H gene silencing in epididymis can inhibit the positive expression rate of P34H and HYD activity in epididymis of mice.
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué)組織胚胎學(xué)教研室;遵義醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校組織胚胎學(xué)教研室;六盤(pán)水市人民醫(yī)院病理科;
【基金】：貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目(黔科合LH字[2015]7567號(hào)) 貴州省科技創(chuàng)新人才團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(黔科合人才團(tuán)隊(duì)[2014]4005號(hào))
【分類(lèi)號(hào)】：R339.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 田永剛;張迎梅;;低劑量三聚氰胺對(duì)小鼠精子質(zhì)量影響的研究[J];四川動(dòng)物;2010年03期

2 王獻(xiàn)理，孫淑清，姜杰，，王彬;電離輻射對(duì)小鼠精子發(fā)生各階段所誘發(fā)的突變研究（摘要）[J];癌變.畸變.突變;1994年05期

3 陸曄,唐一岷,劉麗均,謝恩,薛智謀,徐平;昆明小鼠精子冷凍的研究(簡(jiǎn)報(bào))[J];實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào);2004年01期

4 鄭云勝;洗滌及Percoll梯度離心后小鼠精子脂類(lèi)含量的分析[J];內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報(bào);1994年01期

5 吳紅,孫強(qiáng),李厚達(dá);小鼠精子冷凍的研究[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

6 傅劍云,趙碩,徐彩菊,吳蕙嶺,許天新;甲基磺酸甲酯、環(huán)磷酰胺、絲裂霉素C對(duì)小鼠精子畸形影響的研究[J];癌變.畸變.突變;1998年04期

7 陳秋菊,朱偉杰,李菁;衰老對(duì)小鼠精子成熟和受精能力的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2005年04期

8 何才姑;江澍;錢(qián)長(zhǎng)暉;;甘露糖受體在小鼠精子中的表達(dá)及其在受精中的作用[J];福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年03期

9 狄敏;劉麗均;趙丹鳳;張春燕;趙立虎;薛整風(fēng);徐平;;兩種抗冷凍劑對(duì)不同品系小鼠精子冷凍的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2007年02期

10 汪旭,ＴＳｃｈｍｉｄＩＤＡｄｌｅｒ;多色熒光原位雜交檢測(cè)小鼠精子非整倍體[J];遺傳學(xué)報(bào);1999年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李坤;薛亞梅;呂杰強(qiáng);;鈣調(diào)蛋白抑制劑對(duì)小鼠精子獲能影響的研究[A];2009年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

2 趙冰;徐振軍;李建嬌;白桂芬;劉冰;;克林霉素對(duì)雄性小鼠精子功能的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物繁殖學(xué)分會(huì)第十五屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2010年

3 汪旭;;多色熒光原位雜交檢測(cè)小鼠精子非整倍體[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

4 林健;;不同品系小鼠精子畸形基礎(chǔ)值探討[A];中國(guó)環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)第14屆學(xué)術(shù)交流會(huì)議論文集[C];2009年

5 張才;王宏偉;劉鳳軍;郭路;楊自軍;;微量元素鉬對(duì)雄性小鼠精子畸形率的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜內(nèi)科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 金曉航;馬斌芳;程胖;趙潔;;DAD1在小鼠精子的表達(dá)與意義[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2012年年會(huì)論文文摘匯編[C];2012年

7 李國(guó)正;李榮秀;;營(yíng)養(yǎng)素對(duì)血清中丙二醛含量及人和小鼠精子質(zhì)量的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科內(nèi)分泌會(huì)場(chǎng)（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

8 金曉航;趙潔;馬斌芳;李筠;;DAD1在小鼠精子細(xì)胞的表達(dá)[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

9 李偉;張金山;劉新平;許若軍;張遠(yuǎn)強(qiáng);;MTA1在小鼠精子發(fā)生過(guò)程中的表達(dá)分析[A];2007年中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

10 林菊芳;賈曉峰;宋麗偉;周宇荀;趙健;施惠娟;;重組表達(dá)SOD對(duì)野生小鼠精子的冷凍保護(hù)作用[A];第六屆全國(guó)SOD學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 鄢緋寰;三丁基錫對(duì)雄性小鼠精子發(fā)生和成熟的影響[D];廈門(mén)大學(xué);2008年

2 李玉華;雙酚A引起父源性生殖缺陷的小鼠模型建立與機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2015年

3 劉艷;LRGUK在小鼠精子發(fā)生過(guò)程的功能研究[D];鄭州大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳雪嬌;褪黑素對(duì)小鼠精子冷凍及安鈉咖對(duì)豬凍精解凍的影響研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 龔偉;鉀離子通道在小鼠精子獲能中的作用及氰戊菊酯對(duì)獲能的影響機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2004年

3 周勇;氯化鎘對(duì)小鼠精子功能的初步研究[D];中南大學(xué);2012年

4 李洪波;芹菜對(duì)小鼠精子質(zhì)量及生育力的影響[D];蘭州大學(xué);2009年

5 張?chǎng)?氟中毒對(duì)小鼠精子ATP的影響及生成途徑分析[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 許翠欣;鉛和乙醇聯(lián)合作用對(duì)小鼠精子質(zhì)量的影響及硒拮抗作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

7 俞旭波;神經(jīng)病靶酯酶在三鄰甲苯基磷酸酯抑制小鼠精子發(fā)生的作用[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

8 王帥;Cdc20在小鼠精子發(fā)生過(guò)程中的功能研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

9 張瑞芳;小鼠精子獲能過(guò)程中鈣調(diào)素結(jié)合蛋白的鑒定[D];中南大學(xué);2010年

10 張俊芳;小鼠精子形成期動(dòng)態(tài)發(fā)育的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

本文編號(hào)：2480770