【摘要】：為研究干酪乳桿菌胞外多糖的生物合成和轉(zhuǎn)錄調(diào)控,對其生物合成基因簇中假定的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子LC2W_2170進行克隆,并在大腸桿菌(Escherichia coli)中異源表達。首先,利用PCR技術(shù)從干酪乳桿菌LC2W中擴增出目的基因LC2W_2170,將其插入到大腸桿菌表達載體p ET24a和p ET30a中,構(gòu)建出LC2W_2170 N端或C端和N端均含有His蛋白標(biāo)簽的重組質(zhì)粒。含上述質(zhì)粒的E.coli經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)后,通過聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析并未發(fā)現(xiàn)LC2W_2170蛋白可溶性表達。對LC2W_2170氨基酸序列利用Phobius服務(wù)器分析,發(fā)現(xiàn)該蛋白N端存在跨膜區(qū)(前27個氨基酸為跨膜序列)。切除此跨膜區(qū)域重新構(gòu)建重組表達質(zhì)粒后,在E.coli中成功實現(xiàn)LC2W_2170蛋白可溶性表達。研究為進一步純化該轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,并研究其功能和對胞外多糖生物合成基因簇的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【作者單位】： 上海理工大學(xué)醫(yī)療器械與食品學(xué)院上海食品微生物工程研究中心;揚州市揚大康源乳業(yè)有限公司;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31371809) 新世紀(jì)優(yōu)秀人才計劃(NCET-13-0901) 上海市曙光計劃項目(15SG42) 中國科學(xué)院合成生物學(xué)重點實驗室開放課題
【分類號】：TS201.3

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