發(fā)布時間：2019-04-02 06:31

【摘要】：為了獲得表型穩(wěn)定的工程藻株,實(shí)現(xiàn)基因工程改造策略加快微藻生物燃料產(chǎn)業(yè)發(fā)展的步伐,本研究應(yīng)用同源重組的方法將內(nèi)源性的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的編碼基因轉(zhuǎn)到萊茵衣藻細(xì)胞中,期望獲得表型穩(wěn)定的工程藻株�；趐Hyg3質(zhì)粒我們分別構(gòu)建了ppc1和ppc2的重組載體,采用玻璃珠法轉(zhuǎn)化萊茵衣藻CC400和CC406藻株,應(yīng)用潮霉素抗性的固體培養(yǎng)基篩選得到轉(zhuǎn)入目的片段的藻株。研究表明,轉(zhuǎn)化的藻細(xì)胞中,目的片段可在基因組上穩(wěn)定存在。同源片段長度在0.5~1 kb時,相對較長的片段不利于整合到基因組中。從轉(zhuǎn)化藻株的基因組中能夠擴(kuò)增得到轉(zhuǎn)入的片段,說明轉(zhuǎn)入的目的片段以非同源重組的形式整合到基因組上。轉(zhuǎn)化的藻細(xì)胞多次傳代培養(yǎng)后,仍能檢測到轉(zhuǎn)入的外源片段。本研究進(jìn)一步為微藻細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因工程和同源重組策略的研究提供了行之有效的方法。
[Abstract]:In order to obtain stable phenotypic engineering algae and realize the strategy of genetic engineering to accelerate the development of microalgae biofuel industry, In this study, the endogenous phosphoenolpyruvate carboxylase gene was transferred to Chlamydomonas Rhine cells by homologous recombination. Based on the pHyg3 plasmid, the recombinant vectors of ppc1 and ppc2 were constructed and transformed into Chlamydomonas rhamnoides CC400 and CC406 by glass bead method. The strain was screened with hygromycin-resistant solid medium to obtain the target fragment. The results showed that the target fragment could exist stably on the genome in transformed algal cells. When the homologous fragment length is 0.5 kb, the relatively long fragment is not conducive to integration into the genome. The transformed fragment could be amplified from the genome of the transformed algae plant, indicating that the target fragment was integrated into the genome in the form of non-homologous recombination. After the transformed algal cells were subcultured for many times, the transformed foreign fragments could still be detected. This study provides an effective method for the study of transgenic engineering and homologous recombination strategy of microalgae cells.
【作者單位】： 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;上海辰山植物園中國科學(xué)院上海辰山植物科學(xué)研究中心上海市資源植物功能基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31201975,31172389)資助
【分類號】：Q943.2

【相似文獻(xiàn)】

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9 余沛濤，儲e�，蒋豢M，

本文編號：2452337