【摘要】：本研究根據(jù)NCBI公布的白菜、甘藍(lán)等近源物種的同源基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,采用反轉(zhuǎn)錄PCR法從‘明豐香菇’芥藍(lán)中克隆到八氫番茄紅素合成酶基因BaPSY1,測(cè)序結(jié)果表明該序列長(zhǎng)為1 251 bp,編碼氨基酸416個(gè),理論分子量為46.53 k D,等電點(diǎn)為8.83。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),芥藍(lán)BaPSY1氨基酸序列與油菜、甘藍(lán)、白菜等十字花科植物相似性較高,達(dá)到89%以上,與番茄、甜橙等其他園藝植物的相似性也均超過(guò)70%;同源進(jìn)化樹(shù)分析表明芥藍(lán)BaPSY1與油菜PSY位于同一分支,親緣關(guān)系最近。此外,芥藍(lán)BaPSY1基因序列中稀有密碼子數(shù)量較多,所占比例達(dá)到11.53%,通過(guò)構(gòu)建原核表達(dá)載體pEASY-Blunt E1-BaPSY1,將其轉(zhuǎn)入含稀有密碼子的感受態(tài)細(xì)胞Transetta(DE3)中誘導(dǎo),最終成功獲得了BaPSY1特異性表達(dá)蛋白,并且主要以包涵體形式存在。研究結(jié)果為揭示芥藍(lán)BaPSY1基因功能提供依據(jù)。
[Abstract]:In this study, specific primers were designed according to the homologous gene sequences of Chinese cabbage, cabbage and other close-source species published by NCBI, and the BaPSY1, gene of 8-hydrolycopene synthetase was cloned from 'Mingfeng Lentinula edodes' Brassica oleracea by reverse transcription PCR (RT-PCR). The sequencing results show that the sequence is 1 251 bp, encoding 416amino acids, the theoretical molecular weight is 46.53 KD, and the isoelectric point is 8.83. Sequence comparison showed that the amino acid sequence of kale BaPSY1 was similar to Brassica napus, Brassica oleracea, Chinese cabbage and other cruciferous plants, up to 89%, and over 70% with tomato, orange and other horticultural plants. Phylogenetic tree analysis showed that BaPSY1 and PSY of Brassica napus were located in the same branch and were closely related to each other. In addition, the number of rare codon in the sequence of Chinese kale BaPSY1 gene was more than 11.53%. The prokaryotic expression vector pEASY-Blunt E1 / BaPSY1 was constructed and transferred into competent cell Transetta (DE3) containing rare codon. Finally, the specific expression protein of BaPSY1 was successfully obtained, and it was mainly in the form of inclusion body. The results provide a basis for revealing the function of BaPSY1 gene in Chinese kale.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31500247) 四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(14ZA0016)共同資助
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2451729