【摘要】：【目的】分析‘紅肉蜜柚’果實(shí)汁胞粒化相關(guān)的MYB轉(zhuǎn)錄因子基因特征與表達(dá)模式,探討MYB轉(zhuǎn)錄因子在蜜柚汁胞木質(zhì)素代謝過程中的作用機(jī)制,為研究蜜柚汁胞�；l(fā)生機(jī)制提供借鑒。【方法】以‘紅肉蜜柚’果實(shí)汁胞為試材,參考甜橙MYB全基因組分析,利用生物信息學(xué)分析和PCR技術(shù)克隆Cm MYB330的編碼區(qū)序列及其5’端調(diào)控序列,并對(duì)序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)Cm MYB330在‘紅肉蜜柚’果實(shí)汁胞不同發(fā)育時(shí)期和不同部位的表達(dá)情況進(jìn)行分析。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Cm MYB330與GFP的融合表達(dá)載體注射轉(zhuǎn)化到煙草葉片中進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。利用酵母雙雜交系統(tǒng)對(duì)Cm MYB330進(jìn)行轉(zhuǎn)錄激活活性分析�！窘Y(jié)果】Cm MYB330的編碼區(qū)序列長(zhǎng)度為942 bp,編碼313個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)為核定位蛋白,為典型的R2R3 MYB轉(zhuǎn)錄因子。Cm MYB330與甜橙Cs1g19400.1、Am MYB330等親緣關(guān)系近,都屬于R2R3 MYB第4亞組。Cm MYB330的5’端調(diào)控序列為起始密碼子上游-1 748 bp序列,預(yù)測(cè)該序列含有TATA-box、CAAT-box 2個(gè)啟動(dòng)子核心元件,3個(gè)MBS,1個(gè)AC-I,1個(gè)5UTR Py-rich stretch,還有大量激素(如赤霉素、乙烯、水楊酸等)響應(yīng)元件。Cm MYB330表達(dá)量在‘紅肉蜜柚’果實(shí)汁胞發(fā)育過程中有起伏,但總體呈現(xiàn)上升趨勢(shì),表達(dá)量在花后208 d達(dá)到最大,之后開始下降。在轉(zhuǎn)化p-super1300-Cm MYB330-GFP的煙草葉片細(xì)胞核中檢測(cè)到綠色熒光信號(hào),與預(yù)測(cè)結(jié)果一致,說明Cm MYB330定位在細(xì)胞核中。在Y2H Gold酵母中,Cm MYB330表現(xiàn)為沒有轉(zhuǎn)錄激活活性。【結(jié)論】克隆了‘紅肉蜜柚’MYB轉(zhuǎn)錄因子Cm MYB330編碼區(qū)序列及其5’端調(diào)控序列,Cm MYB330屬于R2R3 MYB第4亞組,與汁胞�；嚓P(guān),為核定位蛋白,同時(shí)分析了其在‘紅肉蜜柚’果實(shí)汁胞發(fā)育過程中的表達(dá)水平,總體呈上升趨勢(shì)。為進(jìn)一步研究Cm MYB330與蜜柚汁胞�；年P(guān)系奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to analyze the gene characteristics and expression patterns of MYB transcription factors related to the granulation of juice cells of 'Red Meat Honey Pomelo', and to explore the mechanism of MYB transcription factors in lignin metabolism of pomelo juice cells. [methods] the juice juices of 'Red Meat Pomelo' were used as test material, and the whole genome analysis of sweet orange MYB was used as reference. The coding region and its 5'- terminal regulatory sequence of Cm MYB330 were cloned by bioinformatics analysis and PCR technique, and the sequence was analyzed by bioinformatics. Real-time fluorescence quantitative PCR was used to analyze the expression of Cm MYB330 at different developmental stages and different parts of fruit juice cells of 'Red Meat Honey Pomelo'. The fusion expression vector of Cm MYB330 and GFP was injected into tobacco leaves by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation for subcellular localization analysis. The transcriptional activation activity of Cm MYB330 was analyzed by yeast two hybrid system. [results] the coding region length of Cm MYB330 was 942 bp, encoding 313 amino acids, which was predicted to be a nuclear localization protein. Cm MYB330 is a typical R2R3 MYB transcription factor. Cm MYB330 is closely related to Cs1g19400.1,Am MYB330 and belongs to R2R3 MYB subgroup 4. The 5 'terminal regulatory sequence of Cm MYB330 is upstream of the initiation codon-1748 bp, which is predicted to contain TATA-box,. CAAT-box has two promoter core elements, three MBS,1, AC-I,1, 5UTR Py-rich stretch, and a large number of hormones (such as gibberellin, ethylene, etc.) (salicylic acid, etc.) the expression of Cm MYB330 fluctuated during the fruit juice cell development of 'Red Meat Honey Pomelo', but showed an upward trend, and the expression level reached the maximum at 208th day after anthesis, and then began to decrease. Green fluorescence signals were detected in the nuclei of tobacco leaves transformed with p-super1300-Cm MYB330-GFP, which was consistent with the predicted results, indicating that Cm MYB330 was localized in the nuclei. In Y2H Gold yeast, Cm MYB330 showed no transcriptional activation activity. [conclusion] the Cm MYB330 coding region and its 5 'terminal regulatory sequence of MYB transcription factor were cloned. Cm MYB330 belongs to R2R3 MYB subgroup 4, which is related to juices granulation. [conclusion] the sequence of Cm MYB330 coding region and its 5' terminal regulatory sequence of 'red pomelo' MYB transcription factor have been cloned. As a nuclear localization protein, the expression level of the protein in the fruit juice cell development of 'Red Meat Honey Pomelo' was analyzed, and the expression level showed an increasing trend as a whole. It laid a foundation for further study on the relationship between Cm MYB330 and nectar Juice granulation.
【作者單位】： 福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院·園藝產(chǎn)品貯運(yùn)保鮮研究所;
【基金】：福建省科技重大專項(xiàng)(2013NZ0002) 國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2014BAD15B01) 福建省科技計(jì)劃星火項(xiàng)目(2016S0022) 清遠(yuǎn)市科技計(jì)劃(2015C002)
【分類號(hào)】：S666.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 劉彤;楊文鳳;�，F(xiàn)周;魏芳;高宏華;羅世巧;吳明;仇鍵;;橡膠樹HbMYB20基因的克隆及其對(duì)擬南芥次生壁發(fā)育的調(diào)控[J];林業(yè)科學(xué);2015年04期

2 宿明星;孫穎顥;施鶴;李秋莉;;植物非生物脅迫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子研究方法[J];生物技術(shù)通報(bào);2015年01期

3 胡位榮;劉順枝;江月玲;林潤(rùn)怡;王玉林;李柏玲;;紅肉蜜柚汁胞枯水特性分析[J];食品科學(xué);2015年10期

4 張健飛;權(quán)瑞黨;黃榮峰;;EAR轉(zhuǎn)錄抑制子結(jié)構(gòu)及功能的研究[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào);2011年04期

5 杜娟;柴友榮;;植物轉(zhuǎn)錄抑制子的結(jié)構(gòu)特征及其作用機(jī)理[J];植物學(xué)通報(bào);2008年03期

6 楊文杰;杜海;方芳;楊婉身;吳燕民;唐益雄;;大豆兩個(gè)MYB轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及表達(dá)分析[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年04期

7 潘東明,鄭國(guó)華,陳桂信,佘文琴,郭志雄,施木田,林慧穎;t/溪蜜柚汁胞�；蚍治鯷J];果樹科學(xué);1999年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 徐倩;枇杷果實(shí)木質(zhì)化的MYB轉(zhuǎn)錄調(diào)控[D];浙江大學(xué);2014年

2 單紅;菊花CmMYB1和CmMYB2轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆及功能鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 佘文琴;t/溪蜜柚汁胞粒化過程中生理變化與基因差異表達(dá)分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 徐玉;蜜柚木質(zhì)素合成相關(guān)基因的克隆與表達(dá)研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2014年

2 朱學(xué)亮;t/溪蜜柚果實(shí)木質(zhì)素代謝研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2009年

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 任美艷;王志林;郭慧琴;薛敏;殷玉梅;王茅雁;;沙冬青C2H2型鋅指蛋白基因AmZFP1的克隆與表達(dá)分析[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);2017年02期

2 孫佩文;呂菲菲;徐艷紅;魏建和;;植物中轉(zhuǎn)錄抑制機(jī)制的研究進(jìn)展[J];植物生理學(xué)報(bào);2017年03期

3 楊華麗;蔡椺椺;呂恃衡;徐世榮;余磊;潘騰飛;潘東明;;‘紅肉蜜柚’CmMYB330基因的分離與表達(dá)分析[J];果樹學(xué)報(bào);2017年03期

4 劉戀;李菲菲;劉翠;吳倩;謝深喜;盧曉鵬;;溫州蜜柑汁胞特征及其離體培養(yǎng)發(fā)育規(guī)律初探[J];中國(guó)南方果樹;2017年01期

5 仇鍵;劉彤;王帆;魏芳;高宏華;楊文鳳;吳明;羅世巧;校現(xiàn)周;;巴西橡膠樹HbMYB52基因的克隆及其在擬南芥中的表達(dá)[J];熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào);2016年06期

6 朱東煌;;異花授粉對(duì)‘t/溪蜜柚’果實(shí)粒化指數(shù)和品質(zhì)的影響[J];東南園藝;2016年05期

7 甘淑萍;閆強(qiáng);崔曉霞;薛冬;趙晉銘;郭娜;王海棠;邢邯;;大豆疫霉菌侵染對(duì)大豆木質(zhì)素含量及合成關(guān)鍵基因表達(dá)的影響[J];大豆科學(xué);2016年05期

8 曾仙珍;王祥軍;李維國(guó);;不同生育期橡膠樹幼莖細(xì)胞壁三要素的變化動(dòng)態(tài)[J];熱帶作物學(xué)報(bào);2016年05期

9 周先艷;龔琪;李菊湘;龍春瑞;沈正松;岳建強(qiáng);;柑橘采后生理及病害研究進(jìn)展[J];保鮮與加工;2016年01期

10 徐世榮;潘鶴立;吳嘉玲;丁安琪;呂恃衡;潘東明;余磊;張智偉;李小婷;;‘紅肉蜜柚’果實(shí)汁胞�；^程中POD同工酶譜分析[J];果樹學(xué)報(bào);2016年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 曾教科;EjAP2-1與EjHSF3調(diào)控采后枇杷果實(shí)冷害木質(zhì)化的轉(zhuǎn)錄機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 潘騰飛;t/溪蜜柚細(xì)菌人工染色體（Bacterial Artificial Chromosome）文庫(kù)的構(gòu)建及其應(yīng)用[D];福建農(nóng)林大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 薛輝;軟籽石榴種子硬度的影響因素及轉(zhuǎn)錄組分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

2 劉玉倩;刺梨果實(shí)中木質(zhì)素合成及相關(guān)基因的表達(dá)分析[D];貴州大學(xué);2015年

3 吳嘉玲;柚汁胞木質(zhì)素解析與POD活性及同工酶譜分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 肖冬長(zhǎng);張智俊;徐英武;楊麗;張鳳雪;王超莉;;毛竹MYB轉(zhuǎn)錄因子PeMYB2的克隆與功能分析[J];遺傳;2013年10期

2 劉順枝;黃忠;胡位榮;江月玲;王小蘭;;t/溪蜜柚及其早熟紅肉突變體成熟果實(shí)SSH文庫(kù)的構(gòu)建及初步分析[J];園藝學(xué)報(bào);2013年07期

3 王傳琦;孔穩(wěn)穩(wěn);李晶;;植物轉(zhuǎn)錄因子最新研究方法[J];生物技術(shù)通訊;2013年01期

4 胡位榮;林斌;李婉君;孫茹;劉順枝;;響應(yīng)曲面法優(yōu)化超聲波提取紅肉蜜柚紅色素工藝[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年28期

5 丁健;鄧秀新;;柑橘果實(shí)�；芯窟M(jìn)展[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年18期

6 劉順枝;江月玲;李小梅;張昭其;胡位榮;;柚類果實(shí)采后生理及貯藏技術(shù)研究進(jìn)展[J];食品科學(xué);2010年21期

7 鄭甲成;徐兆師;胡銀崗;劉婷;李連城;陳明;馬有志;;小麥DREB轉(zhuǎn)錄因子TaAIDFa的互作蛋白篩選[J];麥類作物學(xué)報(bào);2010年02期

8 佘文琴;潘東明;林河通;;t/溪蜜柚果實(shí)成熟過程中汁胞粒化與活性氧代謝的關(guān)系[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年05期

9 姜茜;賈凌云;;蛋白質(zhì)相互作用研究的新技術(shù)與新方法[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2008年10期

10 佘文琴;趙曉玲;潘東明;賴鐘雄;;t/溪蜜柚果實(shí)汁胞�；^程中同工酶變化的研究[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2008年07期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 李義紅;大果水晶梨及其褐色果皮突變體pal基因克隆及表達(dá)分析[D];河北科技師范學(xué)院;2013年

2 范麗;桑樹木質(zhì)素合成基因的生物信息和功能分析[D];西南大學(xué);2013年

3 韋睿;白樺木質(zhì)素BpCCR1基因的克隆及遺傳轉(zhuǎn)化[D];東北林業(yè)大學(xué);2012年

4 李國(guó)慶;碭山酥梨石細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積及結(jié)構(gòu)特性的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 張燁;檸條錦雞兒咖啡酰輔酶A-O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因cDNA和gDNA全長(zhǎng)克隆及生物信息學(xué)分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 秦超;棉花肉桂酰輔酶A還原酶基因（GhCCR4）的遺傳轉(zhuǎn)化和功能分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 師竹娟;甘藍(lán)型油菜木質(zhì)素單體合成基因COMT和F5H的克隆及表達(dá)調(diào)控[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭培元;梁平虎蜜柚[J];山西果樹;2000年02期

2 范仲先;種巨型早熟蜜柚,奔小康路[J];資源開發(fā)與市場(chǎng);2000年03期

3 黃啟忠;巨型天皇蜜柚[J];廣西林業(yè);2001年03期

4 李林;蜜柚快速掛果技術(shù)[J];農(nóng)村新技術(shù);2001年02期

5 李反根,鄒流球,廖云勇,廖水英;桃溪特早蜜柚栽培要點(diǎn)[J];江西園藝;2004年03期

6 陸修閩;黃新忠;盧新坤;金光;陳小明;林慧穎;林海清;林金山;;紅肉蜜柚發(fā)展中應(yīng)注意的若干問題[J];福建果樹;2006年01期

7 蘭海濱;;紅肉蜜柚高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)栽培技術(shù)[J];果農(nóng)之友;2006年07期

8 黃新忠;陸修閩;盧新坤;陳小明;林海清;林金山;蔡盛華;;早熟優(yōu)質(zhì)蜜柚新品種——紅肉蜜柚[J];果農(nóng)之友;2007年01期

9 鄧定洪;;t/溪蜜柚的換代品種——紅肉蜜柚[J];農(nóng)村新技術(shù);2007年02期

10 ;紅肉蜜柚[J];城鄉(xiāng)致富;2007年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 宋冉冉;;漂泊的田野、文化的自知[A];共識(shí)（2012春刊07）[C];2012年

2 黃新忠;陸修閩;金光;鄭雪芳;O憑，

本文編號(hào)：2450232