【摘要】：目的:探討急性髓系白血病(AML)患者WT1 rs16754位點等位基因及基因型分布情況及其與發(fā)病風險的關系;比較WT1 rs16754位點主要等位基因純合型(GG型)與至少含一個次要等位基因(GA/AA型)AML患者的各臨床指標水平、細胞核型異常率及FLT3-ITD突變率;比較GG型與GA/AA型患者化療完全緩解情況及總體生存時間,明確WT1基因rs16754位點多態(tài)性與AML患者化療敏感性及預后的關系;采用meta分析方法總結該位點多態(tài)性與AML預后的關系。方法:1、WT1基因rs16754位點基因型分布情況及與發(fā)病風險的關系收集115例AML住院患者初診時骨髓及177名健康體檢者外周血樣本,提取DNA,WT1基因rs16754多態(tài)性位點兩側設計一對引物,采用高分辨熔解曲線法(HRM)進行基因多態(tài)性位點分型;分型后各基因型隨機抽取5個樣本通過聚合酶鏈反應(PCR)擴增WT1基因第7外顯子(共151 bp),擴增后送華大基因測序驗證HRM法分型的準確性,比較病例組與健康對照組該位點基因型分布有無差異。2、WT1基因rs16754位點不同基因型AML患者各臨床指標間的比較收集AML患者臨床各項檢查指標,包括:年齡、性別、外周血白細胞計數(shù)、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白濃度、血小板計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)、乳酸脫氫酶量、骨髓原始細胞比例、WHO(2008)分型分布;染色體核型分析采用R顯帶技術;聚合酶鏈反應擴增FLT3-ITD基因,產(chǎn)物經(jīng)10%聚丙烯酰胺凝膠電泳,凝膠成像系統(tǒng)拍照讀取結果。分別對主要等位基因純合型組與至少含一個次要等位基因組AML患者以上各項指標進行統(tǒng)計學描述及比較。3、WT1基因rs16754位點不同基因型AML患者組化療反應及生存情況間的比較查閱病例獲知AML患者各自的化療方案,比較主要等位基因純合型組與至少含一個次要等位基因組AML患者在化療用藥方案上組間有無差別。以查閱病歷和電話隨訪的形式進行隨訪,總生存(OS)期定義為確診至死亡或末次隨訪的時間,比較兩組患者化療后完全緩解情況及總體生存時間。4、WT1基因rs16754多態(tài)性位點與AML患者預后關系的meta分析以英文檢索詞“WT1”“polymorphism”“Leukemia,Myeloid,Acute”檢索Pub Med數(shù)據(jù)庫,同時以檢索詞“WT1”、“多態(tài)性”、“急性髓系白血病”檢索中國知網(wǎng)(CNKI)、萬方數(shù)據(jù)庫(Wan Fang)和中國生物醫(yī)學文摘數(shù)據(jù)庫(CBM),時間截止至2015年12月1日。結果:1、115例初發(fā)AML患者中,GG型59例(51.3%),GA型43例(37.4%),AA型13例(11.3%)。健康對照組177例,GG型94例(53.1%),GA型72例(40.7%),AA型11例(6.2%)。其中有1例患者采用HRM法多次分型結果不理想,故將其PCR產(chǎn)物送華大基因測序。隨機抽取的15個樣本采用直接測序與HRM法分型法分別檢測,兩種方法檢測結果100%一致。患者與健康對照組間基因型分布差異無統(tǒng)計學意義(P=0.296),且兩組間年齡(P=0.472)、性別(P=0.596)分布差異也無統(tǒng)計學意義,即組間均衡可比。對照組該位點基因型分布服從Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P=0.938)。對于AML患者,rs16754 G為其主要等位基因,該位點基因型與AML發(fā)病風險無關。2、56例(48.7%)GA/AA型與59例(51.3%)GG型患者在骨髓原始細胞比例上差異有統(tǒng)計學意義(P=0.028)。WT1 rs16754多態(tài)性位點GA/AA基因型組與GG基因型組患者在年齡(P=0.825)、性別(P=0.483)分布上無統(tǒng)計學差異;比較兩組WBC(P=0.823)、RBC(P=0.479)、HGB(P=0.356)、PLT(P=0.455)、中性粒細胞計數(shù)(P=0.737)、LDH含量(P=0.804)、WHO(2008)分型(P=0.439)、染色體核型(P=0.357)及FLT3-ITD突變情況(P=0.480),差異均無統(tǒng)計學意義。3、59例GG型患者化療后,CR 51例(86.4%),56例GA/AA型患者化療后CR 47例(83.9%),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.704)。115例患者隨訪期間,其中16例失訪,99例得到生存情況信息,包括GA/AA組45例,GG組54例;共有5例患者行移植術(行異基因造血干細胞移植術2例,行自體造血干細胞移植術2例,行微移植術1例);GG組3例(5.6%),GA/AA組2例(4.4%),組間移植率無統(tǒng)計學差異(P=1.000)。用Kaplan-Meier法估算患者OS率。經(jīng)Log-rank檢驗,兩組間OS率差異有統(tǒng)計學意義(P=0.035)。相對于GA/AA組患者組,GG組患者組OS率更高,提示等位基因A可能是患者預后的危險因素。采用COX比例風險模型進行分析,校正年齡(≥60歲和60歲)和性別兩因素,結果顯示rs16754位點A等位基因是AML患者生存情況的獨立預后因素,GA/AA型患者死亡的風險高于GG型患者(HR=1.681,95%CI 1.046~2.700,P=0.032)。4、本次meta分析共納入11篇英文文獻,本研究第一部分結果也納入分析,樣本量共計2904例。meta分析結果顯示,rs16754與AML患者化療敏感性指標CR情況無相關性(RR=1.02,95%CI:0.99-1.06,P=0.23),與結局指標總體生存(OS)(HR=0.77,95%CI:0.52-1.15,P=0.21)、5年OS(RR=1.10,95%CI:0.90-1.34,P=0.37)及無復發(fā)生存期(RFS)(HR=0.80,95%CI:0.54-1.19,P=0.27)也無關聯(lián)。結論:1、WT1基因rs16754多態(tài)性位點與AML發(fā)病風險無關。將患者分為GA/AA組和GG組,兩組在年齡、性別分布上差異均無統(tǒng)計學意義。2、GA/AA組和GG組各臨床指標比較結果顯示在WBC、RBC、HGB、PLT、中性粒細胞計數(shù)、LDH水平、WHO(2008)分型及核型情況兩組差異均無統(tǒng)計學意義。兩組FLT3-ITD突變率無差別,但GA/AA組骨髓原始細胞比例更高。3、WT1基因rs16754多態(tài)性位點與化療敏感性無關。分析99例AML患者生存情況,GG組患者OS率高于GA/AA組患者,年齡(≥60歲和60歲)和性別兩因素校正后,結果顯示rs16754位點A等位基因與AML患者預后有關,GA/AA型患者死亡的風險高于GG型患者,提示等位基因A可能是預后的危險因素。4、WT1基因rs16754位點與AML預后各指標無相關性。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R733.71

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本文編號：2448743