【摘要】：目的:探討急性髓系白血病(AML)患者WT1 rs16754位點(diǎn)等位基因及基因型分布情況及其與發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系;比較WT1 rs16754位點(diǎn)主要等位基因純合型(GG型)與至少含一個(gè)次要等位基因(GA/AA型)AML患者的各臨床指標(biāo)水平、細(xì)胞核型異常率及FLT3-ITD突變率;比較GG型與GA/AA型患者化療完全緩解情況及總體生存時(shí)間,明確WT1基因rs16754位點(diǎn)多態(tài)性與AML患者化療敏感性及預(yù)后的關(guān)系;采用meta分析方法總結(jié)該位點(diǎn)多態(tài)性與AML預(yù)后的關(guān)系。方法:1、WT1基因rs16754位點(diǎn)基因型分布情況及與發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系收集115例AML住院患者初診時(shí)骨髓及177名健康體檢者外周血樣本,提取DNA,WT1基因rs16754多態(tài)性位點(diǎn)兩側(cè)設(shè)計(jì)一對(duì)引物,采用高分辨熔解曲線法(HRM)進(jìn)行基因多態(tài)性位點(diǎn)分型;分型后各基因型隨機(jī)抽取5個(gè)樣本通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增WT1基因第7外顯子(共151 bp),擴(kuò)增后送華大基因測序驗(yàn)證HRM法分型的準(zhǔn)確性,比較病例組與健康對(duì)照組該位點(diǎn)基因型分布有無差異。2、WT1基因rs16754位點(diǎn)不同基因型AML患者各臨床指標(biāo)間的比較收集AML患者臨床各項(xiàng)檢查指標(biāo),包括:年齡、性別、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白濃度、血小板計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、乳酸脫氫酶量、骨髓原始細(xì)胞比例、WHO(2008)分型分布;染色體核型分析采用R顯帶技術(shù);聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增FLT3-ITD基因,產(chǎn)物經(jīng)10%聚丙烯酰胺凝膠電泳,凝膠成像系統(tǒng)拍照讀取結(jié)果。分別對(duì)主要等位基因純合型組與至少含一個(gè)次要等位基因組AML患者以上各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述及比較。3、WT1基因rs16754位點(diǎn)不同基因型AML患者組化療反應(yīng)及生存情況間的比較查閱病例獲知AML患者各自的化療方案,比較主要等位基因純合型組與至少含一個(gè)次要等位基因組AML患者在化療用藥方案上組間有無差別。以查閱病歷和電話隨訪的形式進(jìn)行隨訪,總生存(OS)期定義為確診至死亡或末次隨訪的時(shí)間,比較兩組患者化療后完全緩解情況及總體生存時(shí)間。4、WT1基因rs16754多態(tài)性位點(diǎn)與AML患者預(yù)后關(guān)系的meta分析以英文檢索詞“WT1”“polymorphism”“Leukemia,Myeloid,Acute”檢索Pub Med數(shù)據(jù)庫,同時(shí)以檢索詞“WT1”、“多態(tài)性”、“急性髓系白血病”檢索中國知網(wǎng)(CNKI)、萬方數(shù)據(jù)庫(Wan Fang)和中國生物醫(yī)學(xué)文摘數(shù)據(jù)庫(CBM),時(shí)間截止至2015年12月1日。結(jié)果:1、115例初發(fā)AML患者中,GG型59例(51.3%),GA型43例(37.4%),AA型13例(11.3%)。健康對(duì)照組177例,GG型94例(53.1%),GA型72例(40.7%),AA型11例(6.2%)。其中有1例患者采用HRM法多次分型結(jié)果不理想,故將其PCR產(chǎn)物送華大基因測序。隨機(jī)抽取的15個(gè)樣本采用直接測序與HRM法分型法分別檢測,兩種方法檢測結(jié)果100%一致�；颊吲c健康對(duì)照組間基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.296),且兩組間年齡(P=0.472)、性別(P=0.596)分布差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,即組間均衡可比。對(duì)照組該位點(diǎn)基因型分布服從Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P=0.938)。對(duì)于AML患者,rs16754 G為其主要等位基因,該位點(diǎn)基因型與AML發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。2、56例(48.7%)GA/AA型與59例(51.3%)GG型患者在骨髓原始細(xì)胞比例上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.028)。WT1 rs16754多態(tài)性位點(diǎn)GA/AA基因型組與GG基因型組患者在年齡(P=0.825)、性別(P=0.483)分布上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;比較兩組WBC(P=0.823)、RBC(P=0.479)、HGB(P=0.356)、PLT(P=0.455)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(P=0.737)、LDH含量(P=0.804)、WHO(2008)分型(P=0.439)、染色體核型(P=0.357)及FLT3-ITD突變情況(P=0.480),差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、59例GG型患者化療后,CR 51例(86.4%),56例GA/AA型患者化療后CR 47例(83.9%),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.704)。115例患者隨訪期間,其中16例失訪,99例得到生存情況信息,包括GA/AA組45例,GG組54例;共有5例患者行移植術(shù)(行異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)2例,行自體造血干細(xì)胞移植術(shù)2例,行微移植術(shù)1例);GG組3例(5.6%),GA/AA組2例(4.4%),組間移植率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=1.000)。用Kaplan-Meier法估算患者OS率。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn),兩組間OS率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.035)。相對(duì)于GA/AA組患者組,GG組患者組OS率更高,提示等位基因A可能是患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素。采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行分析,校正年齡(≥60歲和60歲)和性別兩因素,結(jié)果顯示rs16754位點(diǎn)A等位基因是AML患者生存情況的獨(dú)立預(yù)后因素,GA/AA型患者死亡的風(fēng)險(xiǎn)高于GG型患者(HR=1.681,95%CI 1.046~2.700,P=0.032)。4、本次meta分析共納入11篇英文文獻(xiàn),本研究第一部分結(jié)果也納入分析,樣本量共計(jì)2904例。meta分析結(jié)果顯示,rs16754與AML患者化療敏感性指標(biāo)CR情況無相關(guān)性(RR=1.02,95%CI:0.99-1.06,P=0.23),與結(jié)局指標(biāo)總體生存(OS)(HR=0.77,95%CI:0.52-1.15,P=0.21)、5年OS(RR=1.10,95%CI:0.90-1.34,P=0.37)及無復(fù)發(fā)生存期(RFS)(HR=0.80,95%CI:0.54-1.19,P=0.27)也無關(guān)聯(lián)。結(jié)論:1、WT1基因rs16754多態(tài)性位點(diǎn)與AML發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。將患者分為GA/AA組和GG組,兩組在年齡、性別分布上差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、GA/AA組和GG組各臨床指標(biāo)比較結(jié)果顯示在WBC、RBC、HGB、PLT、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、LDH水平、WHO(2008)分型及核型情況兩組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組FLT3-ITD突變率無差別,但GA/AA組骨髓原始細(xì)胞比例更高。3、WT1基因rs16754多態(tài)性位點(diǎn)與化療敏感性無關(guān)。分析99例AML患者生存情況,GG組患者OS率高于GA/AA組患者,年齡(≥60歲和60歲)和性別兩因素校正后,結(jié)果顯示rs16754位點(diǎn)A等位基因與AML患者預(yù)后有關(guān),GA/AA型患者死亡的風(fēng)險(xiǎn)高于GG型患者,提示等位基因A可能是預(yù)后的危險(xiǎn)因素。4、WT1基因rs16754位點(diǎn)與AML預(yù)后各指標(biāo)無相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R733.71

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本文編號(hào)：2448743