【摘要】：肌肉生長抑制素(myostatin)是轉(zhuǎn)化生長家族-β(TGF-β)中的一員,對于肌肉的生長和發(fā)育起負(fù)調(diào)控的作用。在本研究中,我們制備了四種轉(zhuǎn)基因小鼠,即分別表達(dá)豬myostatin錯(cuò)義突變體(pm MS),C313Y,豬myostatin切割位點(diǎn)的突變體(RSRR),豬myostatin的野生型前肽(pp MS)以及它的突變體形式(D75A)來探究它們對肌肉生長的影響。而且我們還通過在小鼠體內(nèi)注射豬myostatin的前肽和它的突變體來抑制小鼠內(nèi)源的myostatin,從而探究它們對于肌肉生長的影響。此外,我們還發(fā)現(xiàn)在pm MS的轉(zhuǎn)基因公鼠中肌肉沒有出現(xiàn)增長,但是在pm MS和pp MS的轉(zhuǎn)基因母鼠以及pp MS的轉(zhuǎn)基因公鼠中肌肉卻出現(xiàn)了增長。為了探索為何在pm MS和pp MS的轉(zhuǎn)基因公鼠中出現(xiàn)肌肉生長的差異,我們對肌肉中雄激素受體(AR)和它的突變體AR45通過Western blot進(jìn)行了檢測。所有的研究結(jié)果如下:(1)四種轉(zhuǎn)基因小鼠通過PCR,RT-PCR,q RT-PCR和Southern Blot等方法進(jìn)行了鑒定,結(jié)果顯示四種轉(zhuǎn)基因小鼠均制備成功。(2)除了pm MS轉(zhuǎn)基因雄鼠沒有肌肉增多表型,其余的轉(zhuǎn)基因小鼠肌肉均出現(xiàn)了增多表型。注射豬myostatin的前肽和其突變體的小鼠相比于注射PBS的小鼠肌肉也出現(xiàn)了明顯增多。(3)通過AR和AR45的蛋白表達(dá)量計(jì)算兩者灰度值的比例(AR45/AR)得出在pm MS轉(zhuǎn)基因雌鼠和野生型雌鼠之間AR45/AR沒有差異,但是在pm MS雄鼠和野生型雄鼠之間則具有較大的差異。這些數(shù)據(jù)解釋了為何pm MS的轉(zhuǎn)基因雄鼠和雌鼠肌肉生長存在差異。與此同時(shí),研究結(jié)果顯示AR和AR45的蛋白表達(dá)在pp MS的雄鼠中與pm MS的雄鼠正好相反,這對于我們的推測起到支持作用,即在pm MS的雄鼠中高水平的myostatin成熟肽導(dǎo)致AR45蛋白的高表達(dá)、AR的低表達(dá)進(jìn)而補(bǔ)償了由于外源突變myostatin所引起的肌肉增長�？傊�,這些研究結(jié)果為日后通過人工操控myostatin的表達(dá)或改變其活性來制備高瘦肉率的育種豬和治療肌肉疾病的轉(zhuǎn)基因豬生物醫(yī)學(xué)模型提供了科學(xué)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Myostatin (myostatin) is a member of transforming growth family-尾 (TGF- 尾), which plays a negative role in muscle growth and development. In this study, we prepared four kinds of transgenic mice, namely, expressing porcine myostatin missense mutant (pm MS), C313Y and pig myostatin cleavage site mutant (RSRR), respectively. Porcine myostatin's wild-type propeptide (pp MS) and its mutant form (D75A) were used to explore their effects on muscle growth. We also investigated their effects on muscle growth by injecting porcine myostatin propeptide and its mutants into mice to inhibit endogenous myostatin, in mice. In addition, we also found that there was no muscle growth in pm MS transgenic male mice, but in pm MS and pp MS transgenic female mice and pp MS transgenic male mice muscle growth appeared. In order to explore the differences in muscle growth between pm MS and pp MS transgenic male mice, we detected androgen receptor (AR) and its mutant AR45 in muscle by Western blot. All the results are as follows: (1) four transgenic mice were identified by PCR,RT-PCR,q RT-PCR and Southern Blot. The results showed that all four transgenic mice were successfully prepared. (2) except for pm MS transgenic male mice, no muscle enhancement phenotype was found in the muscle of the other transgenic mice. Compared with the mice injected with PBS, the prepeptide of porcine myostatin also increased significantly. (3) the ratio of gray value (AR45/AR) between AR and AR45 was calculated by calculating the ratio of gray value (AR45/AR) between the two mutants. (3) the transformation in pm MS was obtained by calculating the ratio of gray value between the two groups (AR45/AR). There was no difference in AR45/AR between the genetic female and the wild-type female. However, there was significant difference between pm MS male and wild type male. These data explain why pm MS transgenic male and female mice differ in muscle growth. At the same time, the results suggest that the expression of AR and AR45 proteins in pp MS males is the opposite of that in pm MS males, which supports our conjecture. That is, the high level of mature peptide of myostatin in male mice of pm MS leads to the high expression of AR45 protein, and the low expression of AR in turn compensates the muscle growth caused by exogenous mutation myostatin. In conclusion, these results provide a scientific basis and theoretical basis for the preparation of high lean-meat breeding pigs and transgenic pig biomedical models for treating muscle diseases by artificially manipulating the expression of myostatin or changing its activity in the future.
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S828

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁乃亭,魏玉波,布哈麗且木;水稻超綠突變體“綠花舞”[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2002年S1期

2 楊朝柱;李春壽;舒小麗;張志轉(zhuǎn);張磊;趙海軍;馬傳喜;吳殿星;;富含抗性淀粉水稻突變體的淀粉特性[J];中國水稻科學(xué);2005年06期

3 張煥麗;郭晉太;黃江濤;朱永;韓建明;楊愛國;張俊平;郭瑛;;辣椒黃綠苗突變體9906M的選育及利用[J];辣椒雜志;2006年01期

4 郝中娜;張紅志;陶榮祥;;水稻類病斑突變體的初步研究[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2007年04期

5 韋存虛;謝佩松;周衛(wèi)東;陳義芳;嚴(yán)長杰;;水稻脆性突變體葉的解剖結(jié)構(gòu)和化學(xué)特性[J];作物學(xué)報(bào);2008年08期

6 ;全世界共200000份水稻突變體可供科學(xué)研究[J];分子植物育種;2009年02期

7 王立豐;陳月異;;白條紋水稻突變體的光合特性分析[J];熱帶作物學(xué)報(bào);2010年12期

8 ;中國科學(xué)家從玉米中提取出抗艾蛋白酶突變體[J];廣西科學(xué);2011年01期

9 張水金;鄭軼;朱永生;楊東;涂詩航;周鵬;鄭家團(tuán);黃庭旭;;水稻脆性突變體研究進(jìn)展[J];福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2011年05期

10 李金軍;潘日定;陸金根;高榮村;;水稻無種子類突變體的保存方法研究[J];中國稻米;2013年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 易小平;陳芳遠(yuǎn);盧升安;周開達(dá);;空間環(huán)境誘發(fā)水稻突變體特異親和性研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（上冊）[C];1999年

2 戴新賓;張榮銑;許長成;匡廷云;;水稻葉綠素b減少突變體的光抑制特性研究[A];全國植物光合作用、光生物學(xué)及其相關(guān)的分子生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

3 金衛(wèi)華;曹軍衛(wèi);姚保利;雷銘;;細(xì)菌視紫紅質(zhì)多突變體的構(gòu)建及其功能研究[A];第二屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

4 胡天岑;王奎鋒;李連維;陳靜;蔣華良;沈旭;;SARS冠狀病毒3CL蛋白酶突變體的結(jié)構(gòu)對其聚合-活性關(guān)系的提示[A];中國晶體學(xué)會(huì)第四屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文摘要集[C];2008年

5 李鵬麗;王寧寧;;微型番茄黃葉突變體的獲得與鑒定[A];中國植物生理學(xué)會(huì)第十次會(huì)員代表大會(huì)暨全國學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

6 程備久;mail.hf.ah.cn);李展;mail.hf.ah.cn);朱蘇文;mail.hf.ah.cn);李純;mail.hf.ah.cn);李培金;mail.hf.ah.cn);謝傳曉;mail.hf.ah.cn);;玉米對生突變體的遺傳與分子標(biāo)記研究[A];第八屆全國激光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨《激光生物學(xué)》創(chuàng)刊十周年慶祝會(huì)會(huì)議指南及論文摘要[C];2002年

7 許曉明;張榮銑;;水稻葉綠素缺乏突變體的吸收光能分配特性[A];中國植物生理學(xué)會(huì)全國學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

8 林植芳;彭長連;徐信蘭;林桂珠;張景六;;兩個(gè)新的水稻缺葉綠素b突變體光合作用的熱穩(wěn)定性[A];中國植物生理學(xué)會(huì)第九次全國會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

9 魏玉波;梁乃亭;布哈麗且木;;水稻永綠突變體及應(yīng)用價(jià)值[A];中國科協(xié)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集——核科技、核應(yīng)用、核經(jīng)濟(jì)論壇[C];2005年

10 夏宗薌;鄔鍵;甘建華;黃仲賢;;細(xì)胞色素b_5的一系列突變體的晶體結(jié)構(gòu)及其與性質(zhì)、功能的關(guān)系[A];第九次全國生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 記者 張克;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)水稻衰老調(diào)控分子機(jī)制[N];科技日報(bào);2014年

2 錢海豐 編譯;植物耐鹽基因的研究[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

3 記者 馮衛(wèi)東;美發(fā)現(xiàn)能控制小鼠胖瘦的基因[N];科技日報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李成;誘導(dǎo)超氧化物歧化酶錯(cuò)誤折疊的因素及其分子機(jī)制[D];武漢大學(xué);2012年

2 張子棟;透明顫菌血紅蛋白及其突變體蛋白對芳香族污染物清除作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 Syed Noor Muhammad Shah;黃瓜品系9930誘導(dǎo)突變體的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 康樂群;家蠶新突變體4齡幼蟲致死基因的定位克隆及功能研究[D];江蘇科技大學(xué);2015年

5 史貴霞;大豆子葉折疊突變體cco的轉(zhuǎn)錄組分析及相關(guān)基因的功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 胡運(yùn)高;直立重穗突變體的遺傳分析、候選基因克隆與育種利用[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 TAREK MOHAMED AHMED SOLIMAN(羅大力);通過γ-射線輻射處理菊花外植體篩選花色和花型突變體[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

8 王濵;斑馬魚造血突變體的大規(guī)模篩選以及髓系過氧化物酶缺陷突變體smu681的基因定位克隆與功能研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

9 劉逢舉;陸地棉極短纖維突變體的遺傳、精細(xì)定位與表達(dá)譜分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 王旭;番茄rin突變體胎萌的生理機(jī)制及rin在胎萌中的作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 林婷婷;水稻窄葉白化突變體nul1(t)的鑒定與基因定位[D];西南大學(xué);2015年

2 趙艷娜;擬南芥生長素合成YUCCA基因參與調(diào)控雄配子發(fā)育的機(jī)理研究[D];上海師范大學(xué);2015年

3 朱環(huán)環(huán);兩個(gè)水稻苗期致死突變體abl25和ygll遺傳分析與基因定位[D];上海師范大學(xué);2015年

4 李紅;采用分子動(dòng)力學(xué)模擬探究VWF-A1突變體G561S的親和力變化機(jī)制[D];華南理工大學(xué);2015年

5 谷慧英;芥菜開花整合子SOC1與開花抑制因子SVP、FLC蛋白相互作用[D];西南大學(xué);2015年

6 蔣發(fā)明;斑馬魚消化器官突變體的遺傳篩選和Ubel蛋白的原核表達(dá)純化及抗體生產(chǎn)[D];西南大學(xué);2015年

7 王蓓華;支架蛋白R(shí)ACK1及其突變體與氯離子通道蛋白1(CLIC1)相互作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

8 張玲;水稻矮化并花發(fā)育異常突變體dwarf and deformed flower 2 (ddf2)的基因定位與候選基因分析[D];西南大學(xué);2015年

9 徐金剛;水稻光氧化突變體812HS葉片光合和抗氧化特性的研究[D];南京師范大學(xué);2015年

10 畢煬輝;ZNF750基因S70X突變體在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的功能研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2448611