發(fā)布時(shí)間：2019-01-22 14:55

【摘要】：第一部分Graves病患者131Ⅰ治療前后Treg和Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)及臨床意義目的：了解Graves病(Graves' disease GD)患者131I治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中Thl7及Treg細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化,探討其在GD發(fā)生發(fā)展過程中的作用。方法：通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法分別檢測(cè)45例GD患者131Ⅰ治療前、后及40例正常人外周血PBMC中Foxp3、IL-17、IL-23、IL-27和IFN-γ在mRNA水平的表達(dá)變化。通過化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)GD患者甲狀腺功能水平,并利用SPSS 17.0對(duì)其與細(xì)胞因子的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：131Ⅰ治療前,初診GD患者(To組)PBMC中Foxp3的表達(dá)明顯降低(P0.0001),IL-17、IL-23、IL-27和IFN-γ的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P0.0001)。131I治療一月后(T1組)Foxp3的表達(dá)比T0組有所回升(P=0.0391),但仍低于對(duì)照組(P=0.0150)；IL-17、IL-23、IL-27比T0組均有一定程度的下降(P0.05)但仍高于對(duì)照組(P0.001);IFN-γ趨于正常水平,與對(duì)照組無明顯差異(P=0.3945)。相關(guān)性分析得出,Foxp3與FT3、FT4、TRAb呈負(fù)相關(guān),同時(shí)Foxp3與IL-17的表達(dá)亦呈負(fù)相關(guān)性；IL-17、IL-23與FT3、FT4均呈正相關(guān)；TRAb與IL-23和IL-27的表達(dá)水平呈正相關(guān)。結(jié)論：Treg及Th17相關(guān)的細(xì)胞因子在GD的發(fā)生、發(fā)展中有著重要的作用,131Ⅰ治療可通過影響其細(xì)胞因子的表達(dá)起到治療GD的作用。第二部分Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子—Foxp3基因多態(tài)性與中國漢族人群GD易感性的相關(guān)性研究目的：探討Foxp3基因啟動(dòng)子中-2383、-3279、-3499和非編碼區(qū)IVS9+459共4個(gè)SNP位點(diǎn)與中國漢族人群GD的易感性。方法：收集308名GD患者和306名健康體檢者作為對(duì)照,提取外周血,運(yùn)用PCR-RFLP的方法檢測(cè)Foxp3基因4個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型,計(jì)算基因型與等位基因頻率。同時(shí)用在線SHEsis統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)SNP位點(diǎn)進(jìn)行連鎖不平衡分析和單倍體型分析。結(jié)果：-3279位點(diǎn),AA/CA基因型在GD患者中的頻率顯著高于對(duì)照組(36.4% vs26.5%,P=0.008),等位基因A的頻率也明顯增高(21.4% vs 15.O%,P=0.004)。同時(shí)AA/CA基因型在女性GD中的頻率高于男性GD患者。在IVS9+459位點(diǎn)上,基因型CC的頻率在GD中明顯升高(P=0.006,OR=2.781,95%CI:1.332.6.187).-2383位點(diǎn)和-3499位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率在GD患者和健康對(duì)照中沒有明顯的區(qū)別。我們對(duì)Foxp3基因啟動(dòng)子區(qū)中3個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行單倍體型分析發(fā)現(xiàn),CCA-CAA和TCA三個(gè)單體型在GD和對(duì)照組中的分布存在著明顯的差異(P0.0001,P=0.0008和P0.0001).CAA和TCA單體型在GD患者中的頻率較高,增加GD的患病風(fēng)險(xiǎn)(16.5%vs 10.2%,OR=1.777,95%CI 1.266-2.494和6.5%vs 1.7%,OR=3.979,95%CI 2.001-7.913):而CCA單體型可降低GD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(54.1%vs 65.4%,OR=0.610,95% CI 0.478-0.778).結(jié)論：中國漢族人群GD的易感性與-3279位點(diǎn)和IVS9+459位點(diǎn)的基因多態(tài)性相關(guān),與-2383和-3499位點(diǎn)無關(guān)。CAA和TCA單體型單體型為GD的風(fēng)險(xiǎn)因子,增加GD的易感性,而CCA單體型可作為一個(gè)保護(hù)性因子降低GD的易感性。第三部分Foxp3基因SNP在GD患者中引起的功能性變化研究目的：介于Foxp3基因多態(tài)性與GD的易感性相關(guān),本次研究主要是為了探討Foxp3基因中的SNP在GD患者中所引起的功能性變化。方法：采用PCR和定向克隆技術(shù),將不同單倍體型CCA和CAA的Foxp3基因啟動(dòng)子序列克隆到pGL3-Basic載體中,轉(zhuǎn)染293T和HeLa細(xì)胞后檢測(cè)啟動(dòng)子活性的變化。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)不同基因型的GD患者Foxp3基因的表達(dá)水平,同時(shí)利用生化分析儀檢測(cè)不同基因型GD患者甲狀腺功能及自身抗體水平的差異。結(jié)果：在-3279位點(diǎn),攜帶AA/CA基因型的GD患者的Foxp3基因相對(duì)表達(dá)水平明顯低于攜帶CC基因型的GD患者(P--0.004)。攜帶-3279位點(diǎn)CA基因型的GD病患者的血清FT3的水平明顯低于攜帶CC或者AA基因型的GD患者(P=0.045,P=0.018)。此外,攜帶-3279位點(diǎn)A等位基因的GD患者血清TSH水平升高,而TRAb的水平降低(P=0.014,P=0.017)。攜帶-2383位點(diǎn)TT基因型的GD患者的血清FT3水平較高(P=0.032,P=0.021),攜帶-3499位點(diǎn)A等位基因的GD患者的血清TGAb水平明顯升高(P=0,029)。另外,在293T和HeLa兩種細(xì)胞系中,pGL3-CAA共轉(zhuǎn)染后的相對(duì)熒光強(qiáng)度明顯低于pGL3-CCA轉(zhuǎn)染后的相對(duì)熒光強(qiáng)度(P=0.030和P=0.011)。結(jié)論：Foxp3基因-3279位點(diǎn)由等位基因C突變?yōu)锳后,其啟動(dòng)子活性至少降低40%左右,同時(shí)Foxp3基因mRNA水平的表達(dá)也顯著降低,GD患者的甲狀腺功能也明顯不同。-3279位點(diǎn)為一功能性SNP,為GD的治療提供了新的靶點(diǎn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R581

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本文編號(hào)：2413321