【摘要】：為獲得A亞群禽白血病病毒(ALV-A)env基因的表達(dá)產(chǎn)物,以ALV-A AH10毒株病毒RNA為模板,通過反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增得到env基因,將其克隆到轉(zhuǎn)移載體p Fast Bac1中,轉(zhuǎn)化DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,獲得重組穿梭質(zhì)粒r Bacmid-env A,r Bacmid-env A轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞Sf9,獲得重組桿狀病毒。間接免疫熒光試驗(IFA)和免疫印跡試驗(Western-blot)結(jié)果顯示,重組蛋白可與抗ALV-A抗體發(fā)生特異性反應(yīng),重組蛋白分子大小約為90 000,與預(yù)期大小相符,表明env基因在Sf9細(xì)胞中獲得了良好表達(dá)。
[Abstract]:In order to obtain the expression product of env gene of subgroup A avian leukemia virus (ALV-A), env gene was amplified by reverse transcription PCR using ALV-A AH10 virus RNA as template. Env gene was cloned into the transfer vector pFast Bac1 and transformed into DH10Bac receptive cells. Recombinant baculovirus was obtained by transfection of recombinant shuttle plasmid r Bacmid-env Agnar Bacmid-env A into insect cell Sf9,. The results of indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western blotting assay (Western-blot) showed that the recombinant protein could react specifically with the anti ALV-A antibody. The molecular size of the recombinant protein was about 90 000, which was in accordance with the expected size. The results showed that env gene was well expressed in Sf9 cells.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物免疫工程研究所;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;揚州大學(xué)江蘇省動物預(yù)防醫(yī)學(xué)重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31201881)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2411910