發(fā)布時(shí)間：2019-01-05 01:19

【摘要】：羅非魚雄魚生長明顯優(yōu)于雌魚,生產(chǎn)上一般采用尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)♀×奧利亞羅非魚(O.aureus)♂雜交獲得高雄性率的雜種魚-尼奧羅非魚,雄性率高達(dá)95%以上。為進(jìn)一步探討雜種后代中雄性率偏移形成的機(jī)理。本論文觀察了尼奧羅非魚性腺發(fā)育、性別類型、精子形態(tài)結(jié)構(gòu)與活力,以及在性腺發(fā)育階段芳香化酶cyp19a1a基因mRNA表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平變化特征,為尼奧羅非魚性別決定研究提供資料。通過組織學(xué)方法,研究了0.5-4.5月齡尼奧羅非魚(尼羅羅非魚♀×奧利亞羅非魚♂)的性腺發(fā)育特征與性別類型。結(jié)果表明,0.5月齡尼奧羅非魚原始性腺尚未分化;1月齡,精巢中原始生殖細(xì)胞開始分化成精原細(xì)胞;2.5月齡出現(xiàn)初級精母細(xì)胞;3月齡出現(xiàn)次級精母細(xì)胞;3.5-4月齡精巢中存在不同發(fā)育階段的生殖細(xì)胞,壺腹空腔中分散著稀疏的精子;4.5月齡精巢壺腹腔內(nèi)密集大量精子。在2.5、3.5、4、4.5月齡抽樣中,均檢測到雌魚,2.5-3.5月齡卵巢,以第Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞為主;4-4.5月齡卵巢,以第Ⅲ時(shí)相卵母細(xì)胞為主。結(jié)果初步表明,尼奧羅非魚雜種中觀察到雄性、雌性兩種性別類型,以雄性性別為主;雜種雌、雄魚的性腺均能正常發(fā)育。通過掃描電鏡觀察尼奧羅非魚及尼羅羅非魚精子的外形特征,正常精子由頭部、中段和尾部組成,均存在“正常型”、“短尾型”精子。用血球計(jì)數(shù)板測量了尼奧羅非魚和尼羅羅非魚的精子密度,分別為(2.39±0.43)×109個(gè)/mL、(4.38±0.57)×109個(gè)/mL。在不同梯度pH、K~+和Ca~(2+)離子條件下測定了精子的快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間、壽命及激活率,尼奧羅非魚、尼羅羅非魚精子最適pH均在7.5左右,精子激活率均高于90%,尼奧羅非魚精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間和壽命均低于尼羅羅非魚;K~+=100mmol/L時(shí),精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間最長,尼奧羅非魚和尼羅羅非魚精子分別為57.76±10.88s、64.69±9.10s,K~+=75mmol/L時(shí),精子壽命最長,尼奧羅非魚和尼羅羅非魚精子分別為470.27±4.63s、513.97±5.33s,精子激活率最高。Ca~(2+)=37.6mmol/L時(shí),尼奧羅非魚和尼羅羅非魚精子活力最高,精子快速運(yùn)動(dòng)時(shí)間分別為31.56±4.28s、40.56±4.28s,精子壽命分別為112.78±4.58s、116.11±7.43s。結(jié)果表明,尼奧羅非魚精子形態(tài)正常,精子密度低于尼羅羅非魚,在最適pH、K~+和Ca~(2+)離子條件下,尼奧羅非魚精子活力顯著低于尼羅羅非魚(P0.05)。通過對尼奧羅非魚轉(zhuǎn)錄組高通量測序,cyp19a1a基因CDS區(qū)序列與尼羅羅非魚相同;通過cyp19a1a基因啟動(dòng)子及編碼區(qū)PCR克隆測序,尼奧羅非魚同尼羅羅非魚具有相同的上游啟動(dòng)子及編碼區(qū)序列。以尼羅羅非魚性腺發(fā)育過程精巢、卵巢cyp19a1a基因mRNA表達(dá)作參照,40、60、80、120日齡尼奧羅非魚精巢、卵巢cyp19a1a基因mRNA表達(dá)呈現(xiàn)下降的趨勢,卵巢均高于精巢,其精巢、卵巢表達(dá)量均低于尼羅羅非魚精巢、卵巢。對該基因啟動(dòng)子(SP1、SP2、SP3)BSP甲基化測序分析,尼奧羅非魚精巢甲基化率高于卵巢,在發(fā)育過程中SP1與SP2的甲基化率并不相同,精巢中SP1、SP2都呈上升的趨勢,卵巢中SP1呈上升趨勢,SP2呈現(xiàn)下降后上升的趨勢。120日齡的尼奧羅非魚與尼羅羅非魚SP3段甲基化率差異不明顯�？傮w上來看,較尼羅羅非魚,尼奧羅非魚精巢、卵巢甲基化水平高于尼羅羅非魚。
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【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

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本文編號：2401061