【摘要】：Toll樣受體(TLR)是一類模式識(shí)別受體家族,能夠啟動(dòng)天然免疫和獲得性免疫。其中TLR7基因位于細(xì)胞內(nèi),其廣泛存在于多種免疫細(xì)胞中,并且在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,與許多感染性疾病的抗性、易感性、免疫應(yīng)答相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)薩福克羊和新疆哈薩克羊TLR7基因進(jìn)行PCR-SSCP多態(tài)性分析,探索Toll7基因突變與綿羊肺腺瘤病易感性關(guān)系,探討綿羊不同基因型個(gè)體在人工感染綿羊肺腺瘤病毒過程中的免疫應(yīng)答反應(yīng),通過對(duì)TLR7基因多態(tài)性和OPA感染的免疫應(yīng)答關(guān)系研究,為綿羊抗病育種研究提供參考依據(jù)。人工感染OPA也可以為人類的肺癌提供動(dòng)物模型,更好的為研究人類肺癌提供理論依據(jù)。1.薩�？搜蚝凸_克羊Toll樣受體7基因SSCP多態(tài)性分析與綿羊肺腺瘤病的關(guān)聯(lián)分析利用PCR-SSCP方法對(duì)薩福克羊和哈薩克羊TLR7基因進(jìn)行多態(tài)性分析。結(jié)果表明TLR7基因胞外區(qū)具有多態(tài)性。薩�？搜駿CD-2、ECD-5、ECD-6、ECD-7區(qū)存在多態(tài)性,哈薩克羊ECD-2和ECD-7區(qū)存在突變。經(jīng)測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)薩福克羊有5個(gè)點(diǎn)突變,其中3個(gè)錯(cuò)義突變,2個(gè)同義突變。而哈薩克羊只有3個(gè)突變,其中2個(gè)錯(cuò)義突變,1個(gè)同義突變。薩�？搜駿CD-2區(qū)SSCP分析發(fā)現(xiàn)處于哈迪溫伯格不平衡狀態(tài),且突變帶型BB、AB型,哈薩克羊BB型感染內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒的陽(yáng)性頻率高于正常型,這幾種基因型測(cè)序后發(fā)現(xiàn)其中343位和350位核苷酸發(fā)生突變,同時(shí)具有兩個(gè)突變的羊感染內(nèi)源性綿羊肺腺瘤病毒陽(yáng)性率高于陰性的羊。推測(cè)A343G、A350G的突變可能與病毒易感性有關(guān)。2.TLR7基因ECD-2區(qū)不同型對(duì)早期感染綿羊肺腺瘤病的免疫應(yīng)答TLR7核苷酸A343G和A350G突變的羊與非突變羊進(jìn)行人工感染綿羊肺腺瘤病毒實(shí)驗(yàn),血常規(guī)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)攻毒后第二天,體內(nèi)炎性細(xì)胞數(shù)量到達(dá)最高值,ELISA檢測(cè)IFN-γ、IL-1β、TNF-α、MyD88、TLR7在血清中的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)突變組的表達(dá)水平略高于非突變組。但差異不顯著(P0.05)�？赡苁怯捎谕蛔兘M的炎性反應(yīng)中有更多的致炎因子參與對(duì)病毒的抵抗,其免疫反應(yīng)更加活躍。3.TLR7基因ECD-2區(qū)突變與綿羊肺腺瘤病毒人工感染的臨床病理學(xué)觀察突變組和非突變組攻毒5個(gè)月后進(jìn)行病理剖檢觀察和組織學(xué)觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)突變組羊有OPA的癥狀,肺臟表面有很多灰白色結(jié)節(jié),鏡檢時(shí)在肺泡和支氣管內(nèi)可見上皮細(xì)胞腫瘤性增生灶,并散插于未腺瘤化的肺泡群中,成為乳頭狀腺瘤。肺泡細(xì)胞變?yōu)榱⒎交虻椭鶢罴?xì)胞,由于肺腫瘤結(jié)節(jié)壓迫臨近的肺泡而導(dǎo)致膨脹不全或相鄰肺泡融合。腺瘤病灶之間有數(shù)量不等的未腺瘤化的肺泡群,肺泡腔內(nèi)充滿巨噬細(xì)胞。在終末細(xì)支氣管內(nèi),也有柱狀上皮細(xì)胞增生并突入腔內(nèi),在其周圍有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞環(huán)繞。其中突變組比非突變組的OPA癥狀要嚴(yán)重,說明ECD-2區(qū)的突變綿羊?qū)PA更易感。綜上所述,薩福克羊和哈薩克羊TLR7基因存在多態(tài)性,這種多態(tài)性與疾病抗性或易感性存在相關(guān)性。PCR-SSCP分析表明Toll樣受體7胞外區(qū)基因的多態(tài)性與綿羊肺腺瘤病存在關(guān)聯(lián)。綿羊TLR7基因與抗病力關(guān)系為綿羊抗病選育提供理論依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.26
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本文編號(hào)：2397937