【摘要】：Toll樣受體(TLR)是一類模式識別受體家族,能夠啟動天然免疫和獲得性免疫。其中TLR7基因位于細胞內,其廣泛存在于多種免疫細胞中,并且在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,與許多感染性疾病的抗性、易感性、免疫應答相關。本實驗對薩福克羊和新疆哈薩克羊TLR7基因進行PCR-SSCP多態(tài)性分析,探索Toll7基因突變與綿羊肺腺瘤病易感性關系,探討綿羊不同基因型個體在人工感染綿羊肺腺瘤病毒過程中的免疫應答反應,通過對TLR7基因多態(tài)性和OPA感染的免疫應答關系研究,為綿羊抗病育種研究提供參考依據(jù)。人工感染OPA也可以為人類的肺癌提供動物模型,更好的為研究人類肺癌提供理論依據(jù)。1.薩�？搜蚝凸_克羊Toll樣受體7基因SSCP多態(tài)性分析與綿羊肺腺瘤病的關聯(lián)分析利用PCR-SSCP方法對薩福克羊和哈薩克羊TLR7基因進行多態(tài)性分析。結果表明TLR7基因胞外區(qū)具有多態(tài)性。薩�？搜駿CD-2、ECD-5、ECD-6、ECD-7區(qū)存在多態(tài)性,哈薩克羊ECD-2和ECD-7區(qū)存在突變。經(jīng)測序分析發(fā)現(xiàn)薩福克羊有5個點突變,其中3個錯義突變,2個同義突變。而哈薩克羊只有3個突變,其中2個錯義突變,1個同義突變。薩�？搜駿CD-2區(qū)SSCP分析發(fā)現(xiàn)處于哈迪溫伯格不平衡狀態(tài),且突變帶型BB、AB型,哈薩克羊BB型感染內源性綿羊肺腺瘤病毒的陽性頻率高于正常型,這幾種基因型測序后發(fā)現(xiàn)其中343位和350位核苷酸發(fā)生突變,同時具有兩個突變的羊感染內源性綿羊肺腺瘤病毒陽性率高于陰性的羊。推測A343G、A350G的突變可能與病毒易感性有關。2.TLR7基因ECD-2區(qū)不同型對早期感染綿羊肺腺瘤病的免疫應答TLR7核苷酸A343G和A350G突變的羊與非突變羊進行人工感染綿羊肺腺瘤病毒實驗,血常規(guī)檢測發(fā)現(xiàn)攻毒后第二天,體內炎性細胞數(shù)量到達最高值,ELISA檢測IFN-γ、IL-1β、TNF-α、MyD88、TLR7在血清中的表達水平,發(fā)現(xiàn)突變組的表達水平略高于非突變組。但差異不顯著(P0.05)�？赡苁怯捎谕蛔兘M的炎性反應中有更多的致炎因子參與對病毒的抵抗,其免疫反應更加活躍。3.TLR7基因ECD-2區(qū)突變與綿羊肺腺瘤病毒人工感染的臨床病理學觀察突變組和非突變組攻毒5個月后進行病理剖檢觀察和組織學觀察,結果發(fā)現(xiàn)突變組羊有OPA的癥狀,肺臟表面有很多灰白色結節(jié),鏡檢時在肺泡和支氣管內可見上皮細胞腫瘤性增生灶,并散插于未腺瘤化的肺泡群中,成為乳頭狀腺瘤。肺泡細胞變?yōu)榱⒎交虻椭鶢罴毎?由于肺腫瘤結節(jié)壓迫臨近的肺泡而導致膨脹不全或相鄰肺泡融合。腺瘤病灶之間有數(shù)量不等的未腺瘤化的肺泡群,肺泡腔內充滿巨噬細胞。在終末細支氣管內,也有柱狀上皮細胞增生并突入腔內,在其周圍有淋巴細胞、漿細胞、巨噬細胞環(huán)繞。其中突變組比非突變組的OPA癥狀要嚴重,說明ECD-2區(qū)的突變綿羊對OPA更易感。綜上所述,薩�？搜蚝凸_克羊TLR7基因存在多態(tài)性,這種多態(tài)性與疾病抗性或易感性存在相關性。PCR-SSCP分析表明Toll樣受體7胞外區(qū)基因的多態(tài)性與綿羊肺腺瘤病存在關聯(lián)。綿羊TLR7基因與抗病力關系為綿羊抗病選育提供理論依據(jù)。
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【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S858.26
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本文編號：2397937