發(fā)布時間：2018-12-28 10:02

【摘要】：皮革鞣制過程中產(chǎn)生大量有害物質(zhì),對環(huán)境造成了嚴(yán)重污染。角蛋白酶是一類水解角蛋白的酶,是皮革鞣制中理想的鞣制劑替代品。為了發(fā)掘角蛋白酶重要的基因資源,試驗從土壤中克隆KerA基因,構(gòu)建了原核表達(dá)載體p ET-22b-KerA,通過熱激法轉(zhuǎn)入BL21(DE3)中進(jìn)行表達(dá)并在表達(dá)時間上進(jìn)行了優(yōu)化,對表達(dá)的產(chǎn)物進(jìn)行Western-blot鑒定,通過Ni2+Sepharose Fast Flow分離純化了KerA,并通過水解角蛋白驗證其活性。結(jié)果表明:克隆的KerA基因可以在原核中表達(dá),并具有水解角蛋白的活性。說明基因工程重組手段生產(chǎn)KerA具有可行性。
[Abstract]:A large number of harmful substances are produced in the leather tanning process, which causes serious pollution to the environment. Keratinase is a kind of enzyme that hydrolyzes keratin and is an ideal substitute for tanning agent in leather tanning. In order to explore the important gene resources of keratinase, the KerA gene was cloned from soil. The prokaryotic expression vector p ET-22b-KerA, was transformed into BL21 (DE3) by heat shock and the expression time was optimized. The expressed product was identified by Western-blot, KerA, was isolated and purified by Ni2 Sepharose Fast Flow, and its activity was verified by hydrolytic keratin. The results showed that the cloned KerA gene could be expressed in prokaryotic cells and had the activity of hydrolyzing keratin. It is feasible to produce KerA by genetic engineering recombination.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;溫州大學(xué)生命科學(xué)研究院;吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究所;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項資金項目(CARS-35-02)
【分類號】：Q78;Q55

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