【摘要】：目的對(duì)霍亂弧菌zot毒力基因進(jìn)行表達(dá)并研究重組蛋白的生物活性。方法從霍亂弧菌(Vibrio cholerae)MO45中克隆zot的全基因序列,構(gòu)建其原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)-zot并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌E.coli BL21(DE3)中,通過誘導(dǎo)表達(dá)和親和層析純化重組蛋白,研究zot表達(dá)蛋白對(duì)人小腸上皮細(xì)胞的凋亡作用。結(jié)果純化蛋白的濃度為0.324mg/mL,經(jīng)Western blot驗(yàn)證表達(dá)蛋白為目的蛋白,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)經(jīng)表達(dá)蛋白作用的人小腸上皮細(xì)胞顯示重組zot蛋白能引起人小腸上皮細(xì)胞的早期凋亡。結(jié)論成功克隆表達(dá)了霍亂弧菌毒力基因zot,重組蛋白能引起人小腸上皮細(xì)胞的早期凋亡。
[Abstract]:Objective to express virulence gene of Vibrio cholerae zot and to study the bioactivity of recombinant protein. Methods the whole gene sequence of zot was cloned from (Vibrio cholerae) MO45 of Vibrio cholerae. The prokaryotic expression plasmid pET-32a ()-zot was constructed and transformed into E. coli E.coli BL21 (DE3). The recombinant protein was purified by induction and affinity chromatography. To study the effect of zot expression protein on apoptosis of human intestinal epithelial cells. Results the concentration of purified protein was 0.324 mg / mL. The expressed protein was confirmed by Western blot as the target protein. Flow cytometry analysis showed that recombinant zot protein could induce early apoptosis of human intestinal epithelial cells. Conclusion cloning and expressing virulence gene zot, recombinant protein of Vibrio cholerae can induce early apoptosis of human intestinal epithelial cells.
【作者單位】： 江西省疾病預(yù)防控制中心傳染病所;
【基金】：江西省科技廳項(xiàng)目基金(No.20151BBG70106)~~
【分類號(hào)】：R378.3

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