【摘要】：擬除蟲菊酯類農(nóng)藥是一類合成殺蟲劑,具有高效和廣譜性殺蟲作用,在自然環(huán)境下容易分解,對(duì)哺乳動(dòng)物毒性較低,因此被廣泛使用,從而導(dǎo)致害蟲對(duì)其產(chǎn)生了越來越嚴(yán)重的抗藥性。昆蟲抗藥性機(jī)制涉及大量基因,因此發(fā)現(xiàn)和鑒定抗藥性基因?qū)οx的防治有著關(guān)鍵作用。我們以前的研究表明,融合基因UBL40是一種溴氰菊酯抗藥性相關(guān)基因,在另一項(xiàng)研究中,我們發(fā)現(xiàn)核糖體蛋白L40與溴氰菊酯抗性關(guān)系密切,因此我們推測核仁蛋白在溴氰菊酯抗性中發(fā)揮一定的作用。為進(jìn)一步探索細(xì)胞核基因和溴氰菊酯抗性之間的關(guān)系,我們使用蛋白質(zhì)雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)對(duì)核仁蛋白進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示,細(xì)胞核基因Ran在溴氰菊酯處理后表達(dá)量顯著提高。這意味Ran可能是參與溴氰菊酯應(yīng)激反應(yīng)的基因。已有很多的研究報(bào)道,三磷酸鳥苷(GTP)結(jié)合蛋白R(shí)an在核運(yùn)輸、染色體定位、微管動(dòng)力學(xué)、中心體復(fù)制、動(dòng)粒微管的附件、核膜動(dòng)力學(xué)和吞噬作用等具有重要作用。然而,直到現(xiàn)在,還沒有報(bào)告顯示Ran參與了溴氰菊酯抗藥性。本試驗(yàn)的蛋白質(zhì)雙向電泳結(jié)果表明,在果蠅Kc細(xì)胞中,溴氰菊酯處理組Ran基因的表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組。此外,使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量分析顯示,在不同濃度的溴氰菊酯處理下Ran的表達(dá)量均表現(xiàn)出明顯的上調(diào),免疫印跡結(jié)果分析表明,30 ppm溴氰菊酯處理48 h, Ran的表達(dá)量是對(duì)照組的2.27倍。為進(jìn)一步驗(yàn)證Ran在應(yīng)激反應(yīng)的作用,我們利用dsRNA干擾技術(shù)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)對(duì)Ran基因在溴氰菊酯應(yīng)激中的作用進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示,細(xì)胞過表達(dá)Ran后,對(duì)細(xì)胞有一定程度的保護(hù)作用,而干擾Ran的表達(dá)后,細(xì)胞在一定程度上顯著增加了對(duì)溴氰菊酯的敏感性。綜合上述的研究結(jié)果,我們認(rèn)為Ran參與溴氰菊酯的應(yīng)激反應(yīng),并進(jìn)而與溴氰菊酯抗性的形成相關(guān)。但是Ran能否作為溴氰菊酯抗性的靶標(biāo)基因尚需進(jìn)一步研究與證實(shí)。
[Abstract]:Pyrethroid pesticides are a class of synthetic insecticides, which have high efficiency and broad spectrum insecticidal activities. They are easy to decompose in natural environment and have low toxicity to mammals, so they are widely used. As a result, pests become more and more resistant to them. The mechanism of insect resistance involves a large number of genes, so the discovery and identification of resistance genes play a key role in pest control. Our previous studies have shown that the fusion gene UBL40 is a deltamethrin resistance-related gene. In another study, we found that ribosomal protein L40 was closely associated with deltamethrin resistance. Therefore, we speculate that nucleolar protein plays a role in deltamethrin resistance. In order to further explore the relationship between nuclear gene and deltamethrin resistance, we used two-dimensional electrophoresis and mass spectrometry to analyze nucleolus protein. The results showed that the expression of nuclear gene Ran was significantly increased after deltamethrin treatment. This suggests that Ran may be a gene involved in deltamethrin stress. It has been reported that guanosine triphosphate (GTP) binding protein Ran plays an important role in nuclear transport, chromosome localization, microtubule dynamics, centrosomal replication, attachment of microtubules, nuclear membrane dynamics and phagocytosis. However, until now, there have been no reports of Ran involved in deltamethrin resistance. The results of two-dimensional electrophoresis showed that the expression of Ran gene in Drosophila Kc cells treated with deltamethrin was significantly higher than that in control group. In addition, real-time quantitative PCR analysis showed that the expression of Ran was up-regulated under different concentrations of deltamethrin. Western blot analysis showed that 30 ppm deltamethrin was treated for 48 h. The expression of Ran was 2.27 times higher than that of the control. To further verify the role of Ran in stress response, we used dsRNA interference and cell transfection techniques to verify the role of Ran gene in deltamethrin stress. The results showed that the overexpression of Ran could protect the cells to a certain extent, but after interfering with the expression of Ran, the sensitivity of the cells to deltamethrin was significantly increased to a certain extent. Based on the above results, we conclude that Ran is involved in the stress reaction of deltamethrin and is related to the formation of deltamethrin resistance. However, whether Ran can be used as a target gene for deltamethrin resistance needs further study and confirmation.
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S481.4

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本文編號(hào)：2391990