【摘要】：【目的】構(gòu)建中國(guó)榛屬植物主要栽培種平歐雜種榛實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選體系,并篩選穩(wěn)定的內(nèi)參基因,為榛屬植物的基因表達(dá)分析提供內(nèi)參基因,進(jìn)而為其植物資源利用和創(chuàng)新育種研究提供理論基礎(chǔ)�！痉椒ā坷谜n題組前期對(duì)平歐雜種榛不同親和性授粉、授粉后不同時(shí)間的雌蕊轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù),結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)搜索,共選取12個(gè)候選內(nèi)參基因;以平歐雜種榛主栽品種‘達(dá)維’的盛花期雌蕊、未伸長(zhǎng)期雄花序、幼嫩葉片、花粉、一年生枝形成層、嫩莖、根尖、根蘗等8個(gè)不同組織器官為研究材料;通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR初篩,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)表達(dá)量,并利用ge Norm、Norm Finder、Best Keeper、Delta Ct程序和Ref Finder在線網(wǎng)站評(píng)價(jià)內(nèi)參基因的穩(wěn)定性�！窘Y(jié)果】反轉(zhuǎn)錄PCR初篩表明,12個(gè)候選內(nèi)參基因引物的特異性良好,Cha STP5和Cha TF在不同組織器官材料中表達(dá)存在明顯差異,其余候選內(nèi)參基因在8個(gè)組織中均有表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的表達(dá)譜分析表明,Ch18S r RNA的表達(dá)量最高,Cha STP5表達(dá)量最低,其余10個(gè)候選內(nèi)參基因均為中等表達(dá)量;Cha STP5和Cha TF的穩(wěn)定性最差,其余10個(gè)候選內(nèi)參基因的穩(wěn)定性處于中等水平。ge Norm、Norm Finder、Best Keeper和Delta Ct的結(jié)果表明,Cha Actin均排名第一,為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因,Ch18S r RNA的排名均在前五,而其他候選內(nèi)參基因在不同程序分析結(jié)果中的排名存在差異。穩(wěn)定性綜合分析表明,Cha Actin和Ch18S r RNA的穩(wěn)定性良好,即在8個(gè)不同組織器官中表達(dá)量均一且在4個(gè)穩(wěn)定性分析程序中均排名靠前,適合作為內(nèi)參基因;ge Norm程序的變異系數(shù)分析則表明,選取6個(gè)內(nèi)參基因便可對(duì)RT-q PCR的數(shù)據(jù)進(jìn)行精準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)化處理;相關(guān)性分析表明,4個(gè)程序均在0.01水平上呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性,Norm Finder和Delta Ct程序的相關(guān)性最高,Delta Ct與Best Keeper的相關(guān)性最低�！窘Y(jié)論】建立了平歐雜種榛實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選體系:以反轉(zhuǎn)錄PCR初篩引物,熒光定量PCR分析引物特性及基因表達(dá),4個(gè)程序單獨(dú)評(píng)價(jià)引物穩(wěn)定性,Ref Finder綜合分析選出最適穩(wěn)定內(nèi)參基因,并選出榛屬植物8個(gè)不同組織器官中最為穩(wěn)定的2個(gè)內(nèi)參基因Cha Actin和Ch18S r RNA。
[Abstract]:[objective] to construct the screening system of real-time fluorescence quantitative PCR for the internal reference gene of the main cultivated species of Corylus in China, and to screen the stable internal reference gene, and to provide the internal reference gene for the gene expression analysis of the genus Corylus. Then it provides a theoretical basis for the utilization of plant resources and the study of innovative breeding. [methods] using the data of different compatibility pollination and different time after pollination of Fructus heterophylla, combining with the relevant literature search, A total of 12 candidate internal reference genes were selected. Eight different tissues and organs, such as pistil, immature male inflorescence, young leaves, pollen, annual shoot cambium, tender stem, root tip, root tiller, etc. By reverse transcription PCR screening, real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression, and ge Norm,Norm Finder,Best Keeper,Delta Ct program and Ref Finder online website were used to evaluate the stability of internal reference gene. [results] reverse transcription PCR screening showed that, The specificity of 12 candidate endogenous reference gene primers was good, the expression of Cha STP5 and Cha TF in different tissues and organs was different, and the other candidate endogenous reference genes were expressed in 8 tissues. The expression profile of real-time quantitative PCR showed that the expression of Ch18S r RNA was the highest, and that of Cha STP5 was the lowest, and the other 10 candidate internal reference genes were all moderately expressed. The stability of Cha STP5 and Cha TF was the worst, and the stability of the other 10 candidate genes was at the medium level. The results of ge Norm,Norm Finder,Best Keeper and Delta Ct showed that, Cha Actin was the most stable gene. Ch18S r RNA ranked in the top five, while other candidate internal reference genes were ranked differently in different program analysis results. The stability analysis showed that the stability of, Cha Actin and Ch18S r RNA was good, that is, the expression levels of, Cha Actin and Ch18S r RNA were uniform in 8 different tissues and organs, and ranked first among the four stability analysis programs, so they were suitable as internal reference genes. The coefficient of variation analysis of ge Norm program showed that six internal reference genes could be used to standardize the data of RT-q PCR. The correlation analysis showed that the correlation between, Norm Finder and Delta Ct was the highest at 0. 01 level. The correlation between Delta Ct and Best Keeper was the lowest. [conclusion] A screening system for real-time fluorescent quantitative PCR gene of Corylus heterophylla was established: reverse transcription PCR primer, fluorescent quantitative PCR analysis primer characteristics and gene expression were established. Four programs were used to evaluate the stability of primer by comprehensive, Ref Finder analysis. The most stable internal reference genes Cha Actin and Ch18S r RNA. were selected from 8 different tissues and organs of Hazel.
【作者單位】： 西南大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院;中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所/國(guó)家林業(yè)局林木培育實(shí)驗(yàn)室/林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31500560) 中國(guó)林科院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)(CAFYBB2016QB002)
【分類號(hào)】：S664.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 唐永凱;俞菊華;徐跑;李建林;李紅霞;胡海彥;阮瑞霞;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其在水產(chǎn)上的應(yīng)用[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2010年21期

2 陳旭;齊鳳坤;康立功;李景富;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究進(jìn)展及其應(yīng)用[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年08期

3 孫傲雪;徐鳳花;劉洋;郭慧娟;曹艷花;張曉霞;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR在固氮酶基因檢測(cè)中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);2011年03期

4 黃海泉;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在植物檢疫中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年01期

5 衡靜;梁芳芳;于曉瑩;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其在植物中的應(yīng)用[J];河南農(nóng)業(yè);2013年16期

6 劉麗;何望;周忠義;李琦華;賈俊靜;余紅心;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在水產(chǎn)研究中的應(yīng)用[J];江西飼料;2009年02期

7 薛霜;獨(dú)軍政;高閃電;�；菔|;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究進(jìn)展及其在獸醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào);2010年07期

8 徐楠楠;胡桂學(xué);;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2011年21期

9 許安君;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在糧油轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)中的應(yīng)用[J];糧油食品科技;2013年02期

10 張賀;李波;周虛;譚建華;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)研究進(jìn)展及應(yīng)用[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年S1期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 回文廣;趙廷昌;孫福在;張卉;王建榮;高孝強(qiáng);田麗;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR原理及其應(yīng)用[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)第六屆青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集——植物病理學(xué)研究進(jìn)展（第五卷）[C];2003年

2 歐華;卞美璐;張小燕;陳慶云;李敏;劉軍;陳穎;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在人乳頭狀瘤病毒檢測(cè)中的應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)婦科腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 喬昀;趙英妹;仲俊;張玨;龔捷文;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR在快速檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌中的評(píng)價(jià)與應(yīng)用[A];第一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

4 劉蘋;李平;熊仁平;趙艷;朱敏;周元國(guó);;Wistar大鼠c-ski基因部分序列的克隆、測(cè)序及實(shí)時(shí)熒光定量PCR的建立[A];第七屆全國(guó)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

5 許小紅;劉在新;包慧芳;王雯慧;牛繼偉;;實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)及其存在的問(wèn)題和優(yōu)化方案[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2006年

6 李翊衛(wèi);王惠軍;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)胸水端粒酶活性[A];2006年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

7 郭時(shí)金;徐倩倩;周春鳳;張志美;付石軍;沈志強(qiáng);;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

8 盧亦愚;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及其在病毒性疾病應(yīng)急診斷中的應(yīng)用[A];應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件論壇論文集[C];2005年

9 彭年才;李春彬;李紅東;李煒;龔大江;張鎮(zhèn)西;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的研制[A];中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程進(jìn)展——2007中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程聯(lián)合學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2007年

10 吉永;胡大春;趙曉麗;邵劍春;劉德華;;雙色實(shí)時(shí)熒光定量PCR快速檢測(cè)臨床常見(jiàn)細(xì)菌方法建立[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 記者 張平陽(yáng) 楊斌鵠;快速檢測(cè)甲流 西安批量生產(chǎn)關(guān)鍵設(shè)備[N];西安日?qǐng)?bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 秦子禹;蘋果內(nèi)參基因的篩選及三種潛隱性病毒TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 王好;鯉皰疹病毒3型實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立及囊膜蛋白108的表達(dá)免疫研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 湯虹;生物質(zhì)降解嗜熱厭氧菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用[D];華南理工大學(xué);2015年

2 許京鋒;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)內(nèi)、外源IGF-Ⅰ表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 劉云彥;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)巴爾通體方法的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 劉淑萍;IFN-λ1-3 mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立及IFN-λ1的表達(dá)與呼吸道病原關(guān)系的初探[D];南華大學(xué);2015年

5 楊洋;曲霉菌實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)體系的建立[D];湖南師范大學(xué);2016年

6 劉娟;三種牛泰勒蟲(chóng)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

7 鄭雪艷;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)B族溶血性鏈球菌價(jià)值的Meta分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

8 張欣欣;牛副流感病毒3型實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

9 劉釗;乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法—熒光定量PCR法[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 王驍;基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的大豆內(nèi)參基因篩選[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：2382110