【摘要】：為探索啟動子在熱休克蛋白90表達調(diào)控中的作用,本研究在課題組已有雜色鮑HSP90基因cDNA的基礎(chǔ)上,通過Genome walking、Tail-PCR和常規(guī)PCR等技術(shù)克隆獲得該基因的5′調(diào)控區(qū)序列。在翻譯起始位點(ATG)和第一外顯子(長度94 bp)之間有一個809bp的內(nèi)含子,第一外顯子之前的5′調(diào)控區(qū)共2800 bp,從預(yù)測的轉(zhuǎn)錄起始位點(A)起,共2811 bp。在轉(zhuǎn)錄起始位點(A)上游 30 bp處存在TATA box。潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點包括ATF、TBP、Sp1、Oct-1、C/EBPalpha、NF-1、NF-κappa B、GATA-1、Sox-2等。CpG島預(yù)測軟件分析其含1個CpG島,長度為131 bp。實驗構(gòu)建了8個啟動子缺失片段的螢火蟲熒光素酶表達載體,通過瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞并進行雙熒光素酶報告基因活性檢測,確定雜色鮑HSP90基因核心啟動子區(qū)位于 98~83 bp。在 624~ 539 bp,Oct-1、C/EBPalpha、NF-1這3個轉(zhuǎn)錄因子都起到一定的抑制作用。
[Abstract]:In order to explore the role of promoter in the regulation of heat shock protein 90 (HSP90) expression, the 5 'regulatory region of HSP90 gene was cloned by Genome walking,Tail-PCR and conventional PCR on the basis of cDNA of HSP90 gene. There is an intron of 809bp between the translation initiation site (ATG) and the first exon (94 bp in length), and the 5 '-regulatory region preceding the first exon 2800 bp, from the predicted transcriptional initiation site (A) to a total of 2811 bp.. TATA box. exists at 30 bp upstream of transcription initiation site (A) Potential transcriptional factor binding sites include ATF,TBP,Sp1,Oct-1,C/EBPalpha,NF-1,NF- 魏 appa, GATA-1, Sox-2 and so on. The CpG island prediction software analysis contains one CpG island and its length is 131 bp.. Eight fluorescent luciferase expression vectors with missing promoter fragments were constructed. By transient transfection of 293T cells and detection of the activity of double luciferase reporter gene, the core promoter region of HSP90 gene of abalone was determined to be located in the bp.. These three transcription factors all play a certain role in the inhibition of T624 ~ 539 bp,Oct-1,C/EBPalpha,NF-1.
【作者單位】： 集美大學水產(chǎn)學院農(nóng)業(yè)部東海海水健康養(yǎng)殖重點實驗室福建;福建農(nóng)林大學動物科學學院;
【基金】：國家自然科學基金(41176152) 集美大學創(chuàng)新團隊基金(2010A001)~~
【分類號】：Q78;S917.4

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本文編號：2381354