【摘要】：團頭魴(Megalobrama amblycephala)是我們國家在淡水養(yǎng)殖魚類中占有舉足輕重地位的一個優(yōu)良品種,近些年,由于養(yǎng)殖規(guī)模的擴大化,養(yǎng)殖環(huán)境的惡化,集約化養(yǎng)殖程度的大幅度提高,各類疾病頻發(fā)。其中,對團頭魴影響最大的就是由嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)感染引起的細(xì)菌性敗血癥,可導(dǎo)致魚體大量死亡。目前,還沒有快速有效的方法對其進行預(yù)防和治療。本研究用嗜水氣單胞菌感染團頭魴區(qū)分抗病和易感組,通過PCR擴增及測序在MHC Ⅱα基因上篩選單核苷酸多態(tài)位點(Single nucleotide polymorphisms,SNP),利用高分辨率溶解曲線法和限制性內(nèi)切酶酶切法對SNP進行分型,分析其多態(tài)性及與抗病性狀之間的關(guān)系。在MHC Ⅱα基因上共篩選出35個候選SNP位點,占MHC Ⅱα基因總堿基的1.45%,包含30個轉(zhuǎn)換位點,5個顛換位點。其中外顯子部分有16個,內(nèi)含子部分7個,5'非編碼區(qū)有1個,3'非編碼區(qū)有11個。有13個SNP位點位于編碼區(qū),占總氨基酸位點的5.56%,位于839 bp的T/A顛換和1663 bp的A/G轉(zhuǎn)換是無義突變,其余11個SNP位點為有義突變。MHC Ⅱα基因的21個抗原結(jié)合位點(Peptide binding region,PBR)中,有4個位點變異,變異率為19.05%;而non-PBR的變異率僅為8.20%(5/61)。結(jié)果證實團頭魴MHC Ⅱα基因含有豐富的多態(tài)位點、具有極高的特異性且對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生了一定影響。α1結(jié)構(gòu)域的SNP位點分別占總堿基和總氨基酸位點的4.88%和10.98%,明顯高于α2結(jié)構(gòu)域的1.08%和3.22%。這是由于α1結(jié)構(gòu)域存在的抗原肽結(jié)合區(qū)具有高度的多態(tài)性,再次證實PBR位點存在于α1結(jié)構(gòu)域。表明抗原結(jié)合位點區(qū)域的多態(tài)性高于非抗原結(jié)合位點的多態(tài)性,同時也表明氨基酸的替代、替換集中出現(xiàn)在多肽結(jié)合位點上。NJ(Neighbor-joining)法構(gòu)建的系統(tǒng)進化樹中,團頭魴MHC Ⅱα基因和數(shù)量眾多的硬骨魚類集聚成為一個分支,側(cè)面說明了硬骨魚類應(yīng)該是單系起源的;另外,硬骨魚又一分為二,團頭魴和別的鯉科魚類分了一支,鮭鱒魚類為另外一支,二者獨自進化,互不影響。由此可見,團頭魴與鯉科魚類中的草魚(Ctenopharyngodon idella)關(guān)系最近,與斑馬魚(Danio rerio)、建鯉(Crprinus carpio jian)的關(guān)系稍遠(yuǎn),與大西洋鮭(Salmo salar)、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)的關(guān)系較遠(yuǎn),與其他脊椎動物、哺乳動物的關(guān)系最遠(yuǎn)。對分型成功的5個SNP位點在易感和抗病組中各100尾魚的基因型頻率和等位基因頻率進行了統(tǒng)計。通過卡方檢驗分析發(fā)現(xiàn)位于1395 bp(T/A)位點的基因型頻率和等位基因頻率在易感和抗病組中差異極顯著(P0.01),位于221bp(G/T)和1859 bp(G/T)位點的基因型頻率和等位基因頻率在易感組和抗病組中差異顯著(P0.05)。其中位于第三外顯子1395bp(T/A)位點的突變導(dǎo)致天冬氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼?引起了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的改變,進而改變了魚體的抗病性。位于5'非編碼區(qū)221bp(G/T)位點和位于3'非編碼區(qū)1859bp(G/T)位點的突變沒有導(dǎo)致氨基酸改變,但實驗結(jié)果卻顯示與抗病關(guān)聯(lián)。本研究結(jié)果表明團頭魴MHC Ⅱα基因的多態(tài)性和抗細(xì)菌性敗血癥性狀顯著關(guān)聯(lián),進一步分析表明,純合個體對嗜水氣單胞菌引起的細(xì)菌性敗血病抗性更高。本實驗初步分析獲得的相關(guān)SNP標(biāo)記及相應(yīng)的優(yōu)勢、劣勢基因型,能夠在進行團頭魴抗病育種工作時為親本的選擇提供理論依據(jù),也為分子遺傳標(biāo)記和團頭魴抗病基因篩選奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S917.4

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本文編號：2372246