發(fā)布時(shí)間：2018-11-23 06:40

【摘要】：目的克隆藥用真菌豬苓細(xì)胞色素P450基因并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。方法利用RT-PCR技術(shù)取得基因c DNA全長;利用在線工具預(yù)測蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)域等分子特征;用MEGA 6.0分別對氨基酸進(jìn)行多序列比對和進(jìn)化關(guān)系分析。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)從中國野生豬苓菌核(Polyporus umbellatus)中克隆得到11個(gè)P450超家族基因,該11個(gè)基因c DNA包含的完整開放閱讀框在1 326~1 635 bp之間,編碼蛋白含442~545個(gè)氨基酸之間,相對分子質(zhì)量在(48.9~61.5)×103之間,理論等電點(diǎn)在6.3~8.9之間。序列分析發(fā)現(xiàn)其具有保守的P450結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列多重比對及系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示這11個(gè)細(xì)胞色素P450基因都隸屬于擔(dān)子菌類。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析表明,這9個(gè)基因在不同的菌核部分都有表達(dá),除基因comp18720、comp26906、comp32003及comp33717在被蜜環(huán)菌侵染部位的表達(dá)量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于未被蜜環(huán)侵染的豬苓菌核,其他7個(gè)基因都是表達(dá)顯著上調(diào)。結(jié)論藥用真菌豬苓11種P450酶基因的分子特征為進(jìn)一步研究其在豬苓菌核防御蜜環(huán)菌侵染的作用奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to clone the cytochrome P450 gene of medicinal fungus Polyporus umbellata and analyze it by bioinformatics. Methods the full length of c DNA gene was obtained by RT-PCR technique, the physicochemical properties and domain characteristics of the protein were predicted by on-line tools, and the amino acid sequence alignment and evolutionary relationship were analyzed by MEGA 6.0, respectively. Results in this study, 11 P450 superfamily genes were cloned from the sclerotia sclerotiorum (Polyporus umbellatus) of Chinese umbellus umbellata. The complete open reading frame contained in c DNA was between 1 326 and 1 635 bp, and the encoding protein contained 442n545 amino acids. The relative molecular weight is (48.9 ~ 61.5) 脳 10 ~ 3 and the theoretical isoelectric point is between 6.3 ~ 8.9. Sequence analysis showed that it had a conserved P450 domain. The results of multiple amino acid sequence alignment and phylogenetic tree showed that the 11 cytochrome P450 genes belonged to basidiomycetes. Real-time fluorescence quantitative RT-PCR analysis showed that all the 9 genes were expressed in different sclerotia, except for comp18720,comp26906,comp32003 and comp33717, which were significantly lower than those in the sclerotia of Polyporus umbellata infected by Armillaria mellea. The other seven genes were significantly up-regulated. Conclusion the molecular characteristics of 11 P450 enzyme genes of medicinal fungus Polyporus umbellata lay a theoretical foundation for further study on the role of P450 enzyme gene in the prevention of Armillaria mellea infection by Polyporus umbellata sclerotia.
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;江蘇理工學(xué)院電氣信息工程學(xué)院生物信息與醫(yī)藥工程研究所;
【基金】：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃資助(2014CB13830X) 國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31201666) 山西省煤基重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目資助項(xiàng)目(FT2014-03) 河北山區(qū)特色中藥材種質(zhì)資源評價(jià)與仿野生栽培技術(shù)研究與示范資助項(xiàng)目(16232503D)
【分類號】：S567.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2350647