【摘要】：辣椒輕斑駁病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)屬于煙草花葉病毒屬,是辣椒的重要病毒種類之一。將PMMoV的外殼蛋白(cp)基因克隆至原核表達載體pET32a(+)中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo),重組PMMoV CP蛋白以可溶形式表達,純化后獲得分子量約35 kDa的融合CP蛋白。以該重組蛋白為抗原免疫新西蘭兔制備了PMMoV CP特異性抗血清。Western blot檢測結(jié)果表明該抗血清與重組CP蛋白發(fā)生強烈的免疫反應(yīng),間接酶聯(lián)免疫吸附測定(ID-ELISA)結(jié)果顯示該抗血清針對重組CP蛋白的效價達1∶25 600,針對PMMoV病汁液的效價達1∶4 000,檢測靈敏度為1∶3 200,且該抗血清不與PMMoV同屬或不同屬的其它6種病毒汁液發(fā)生免疫反應(yīng),具有較好的特異性。利用該抗血清對42份田間辣椒病樣進行檢測,陽性率達38%,與進口商品化試劑盒檢測結(jié)果一致,說明該抗血清可用于PMMoV的ELISA診斷。
[Abstract]:Capsicum light mottle virus (Pepper mild mottle virus,PMMoV) belongs to the genus Tobacco Mosaic virus (TMV) and is one of the most important viruses in capsicum. The coat protein (cp) gene of PMMoV was cloned into prokaryotic expression vector pET32a () and transformed into Escherichia coli BL21 (DE3). After IPTG induction, the recombinant PMMoV CP protein was expressed in soluble form. After purification, the fusion CP protein with molecular weight of about 35 kDa was obtained. New Zealand rabbits were immunized with the recombinant protein as antigen. The results of. Western blot detection showed that the antiserum reacted strongly with the recombinant CP protein. The results of indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ID-ELISA) showed that the titer of the antiserum against recombinant CP protein reached 1:25 600, and for PMMoV disease juice was 1:4 000. The detection sensitivity was 1:3 2002#. The antiserum did not react with the other 6 viruses of the same genus or different genus of PMMoV and had good specificity. The antiserum was used to detect 42 field pepper samples, and the positive rate was 38%, which was consistent with the results of commercial kit, which indicated that the antiserum could be used for the ELISA diagnosis of PMMoV.
【作者單位】： 貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;貴州省植物生理與發(fā)育調(diào)控重點實驗室;
【基金】：教育部長江學(xué)者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃資助(PCSIRT1227) 貴州省重點實驗室項目[黔科合計Z字(2011)4005號] 貴州省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目[黔科合NY字(2014)3036]
【分類號】：S436.418

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