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三角帆蚌KuSPI基因的克隆及表達(dá)分析

發(fā)布時間:2018-11-11 14:53
【摘要】:Kuntiz型絲氨酸蛋白酶抑制劑(Kuntiz-type serine proteinase inhibitor,KuSPI)又稱胰腺胰蛋白酶抑制劑,能夠和相應(yīng)的蛋白酶互作來調(diào)控生物體內(nèi)的級聯(lián)反應(yīng)。本研究通過RACE克隆得到三角帆蚌KuSPI cDNA全序列共624 bp,包含38 bp和148 bp的5'和3'端UTR,ORF(open reading frame)438 bp,編碼氨基酸145個,分子量為16 397.5 u,KuSPI氨基酸序列的同源性分析后發(fā)現(xiàn)其包含1個典型Kuntiz結(jié)構(gòu)域,屬于典型的KuSPI基因。qRT-PCR檢測表明:KuSPI基因在閉殼肌、外套膜、腸、斧足、肝、血液、鰓、性腺和腎臟中均有表達(dá),在外套膜中最高。利用嗜水氣單胞菌進行誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn),KuSPI基因在外套膜中表達(dá)量變化最大,呈現(xiàn)明顯的先升高再降低趨勢。外套膜是三角帆蚌先天免疫的首道防線,我們推測Ku SPI基因在其免疫反應(yīng)中起到重要作用。
[Abstract]:Kuntiz serine protease inhibitor (Kuntiz-type serine proteinase inhibitor,KuSPI), also known as pancreatic trypsin inhibitor, can interact with protease to regulate the cascade reaction in vivo. In this study, the complete KuSPI cDNA sequence of Hyriopsis cumingii was cloned by RACE. The total 624 bp, sequence contained 5 'and 3' -terminal UTR,ORF (open reading frame) 438 bp, encoding 145 amino acids of 38 bp and 148 bp, the molecular weight of which was 16 397.5 u. Homology analysis of KuSPI amino acid sequence revealed that it contains a typical Kuntiz domain, which belongs to a typical KuSPI gene. QRT-PCR analysis showed that KuSPI gene was found in obturator muscle, coat membrane, intestine, axe foot, liver, blood, Gill, and Gill. Both gonads and kidneys were expressed, and the highest expression was found in the mantle. After induction by Aeromonas hydrophila, it was found that the expression of KuSPI gene was the most varied in the coat membrane, showing a tendency of first increasing and then decreasing. The coat membrane is the first line of defense for congenital immunity of Hyriopsis cumingii. We speculate that Ku SPI gene plays an important role in the immune response of Hyriopsis cumingii.
【作者單位】: 上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點實驗室;上海市水產(chǎn)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心;
【基金】:國家自然科學(xué)基金項目(31101939) 上海市教委科研創(chuàng)新重點項目(13ZZ128) 上海高校知識服務(wù)平臺項目(ZF1206)共同資助
【分類號】:S917.4

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