【摘要】：為探明β-1,3-葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase)對油菜(Brassica campestris)抵御低溫脅迫能力的作用,通過蛋白質(zhì)譜分析得到β-1,3-葡聚糖酶蛋白,采用RT-PCR技術(shù)克隆白菜型冬油菜(B.rapa)隴油6號和天油4號β-1,3-葡聚糖酶的c DNA序列;并對該序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析;進(jìn)而采用實時熒光定量PCR及半定量PCR檢測β-1,3-葡聚糖酶基因在低溫脅迫下的表達(dá)模式。結(jié)果獲得長度為1 032 bp的隴油6號β-1,3-葡聚糖酶基因開放閱讀框,編碼343個氨基酸,相對分子量為38.102k Da,理論等電點為6.63,其與菜心(B.rapa subsp.chinensis)和甘藍(lán)型油菜(B.napus)的蛋白質(zhì)氨基酸序列同源性高達(dá)93.94%。該基因編碼的酶是一個主要由α-螺旋組成的親水性穩(wěn)定蛋白,含有1個信號肽,存在2個跨膜結(jié)構(gòu)域。該基因在進(jìn)化上高度保守,其保守序列屬于植物的糖基水解酶家族17特有的保守結(jié)構(gòu)域。β-1,3-葡聚糖酶基因表達(dá)模式分析顯示,4°C時該基因上調(diào)表達(dá),繼續(xù)低溫( 4°C)脅迫處理,該基因上調(diào)表達(dá)至峰值,至 8°C時其表達(dá)下調(diào)。研究表明從白菜型冬油菜中克隆的β-1,3-glucanase在冬油菜品種隴油6號抗寒過程中發(fā)揮作用。
[Abstract]:In order to find out the effect of 尾 -1n 3-glucanase gene on the ability of rape (Brassica campestris) to resist low temperature stress, 尾 -1N 3-glucanase protein was obtained by protein spectrum analysis. RT-PCR technique was used to clone the c DNA sequences of Longyou 6 and Tianyu 4 尾 -1 glucanase from Brassica campestris (B.rapa). The sequence was analyzed by bioinformatics, and the expression pattern of 尾 -1m3-glucanase gene under low temperature stress was detected by real-time fluorescence quantitative PCR and semi-quantitative PCR. Results A 1 032 bp open reading frame of Longyou 6 尾 -1Glucanase gene was obtained, encoding 343 amino acids, with a relative molecular weight of 38.102 k Da, and a theoretical isoelectric point of 6.63. Its amino acid sequence homology with B.rapa subsp.chinensis and B.napus is 93.94. The enzyme encoded by this gene is a hydrophilic stable protein mainly composed of 偽 -helix, which contains a signal peptide and two transmembrane domains. This gene is highly conserved in evolution and belongs to the conserved domain of the glycosylhydrolase family 17 of plants. The expression pattern of 尾-1 and 3-glucanase gene was up-regulated at 4 擄C. The gene was up-regulated to a peak at 8 擄C and down-regulated at 8 擄C after continued hypothermia (4 擄C) stress. The results showed that 尾 -1N 3-glucanase cloned from winter rape of Chinese cabbage played a role in cold resistance of winter rape variety Longyou 6.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院甘肅省油菜工程技術(shù)研究中心甘肅省作物遺傳改良與種質(zhì)創(chuàng)新重點實驗室;河西學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(No.CARS-13) 國家自然科學(xué)基金(No.31460356,No.31560397,No.3166040,No.31660404) 國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(No.2015CB150206) 科技部油菜雜種優(yōu)勢利用技術(shù)與強(qiáng)優(yōu)勢雜交種創(chuàng)制(No.2016YFD0101300) 甘肅省教育廳科研專項(No.2015A-077)
【分類號】：S565.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 婁樹寶;彭東君;王輝;;大豆β-1,3-葡聚糖酶的抑菌活性[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報;2008年03期

2 周躍鋼;;水稻β-1,3-葡聚糖酶疏水簇特性的研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年03期

3 崔百明,祝建波,肖璐,王愛英,朱新霞,樂錦華,陳正華;轉(zhuǎn)β-1,3-葡聚糖酶基因和幾丁質(zhì)酶基因棉花[J];生物技術(shù);2002年04期

4 王志成;易自力;蔣建雄;覃靜萍;肖亮;儲成才;;幾丁質(zhì)酶基因和葡聚糖酶基因轉(zhuǎn)化秈稻的研究[J];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2009年04期

5 高玉龍;郭旺珍;王磊;張?zhí)煺?;一個棉花β-1,3-葡聚糖酶基因全長cDNA的克隆與特征分析[J];作物學(xué)報;2007年08期

6 方靜平;蘇亞春;游倩;闕友雄;許莉萍;陳如凱;;甘蔗β-1,3-葡聚糖酶基因的電子克隆與分析[J];生物信息學(xué);2012年03期

7 高軒;江昌俊;朱林;余梅;葉愛華;鄧威威;;茶樹β-1,3葡聚糖酶基因在大腸桿菌中的優(yōu)化表達(dá)[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2007年04期

8 黎柳君;魏慧敏;吳守鋒;郭軍偉;杜林方;;青稞中β-1,3-葡聚糖酶的純化及其抗血清的制備[J];植物生理學(xué)通訊;2006年03期

相關(guān)會議論文 前3條

1 阮小蕾;李華平;;秈稻中一個完整β-1.3-葡聚糖酶基因的克隆與測序[A];中國植物病理學(xué)會2005年學(xué)術(shù)年會暨植物病理學(xué)報創(chuàng)刊50周年紀(jì)念會論文集[C];2005年

2 阮小蕾;李華平;;秈稻中一個完整B-1.3-葡聚糖酶基因的克隆與測序[A];中國植物病理學(xué)會2005年學(xué)術(shù)年會暨植物病理學(xué)報創(chuàng)刊50周年紀(jì)念會論文摘要集[C];2005年

3 蘇亞春;陳珊珊;吳期濱;方靜平;闕友雄;郭晉隆;許莉萍;陳如凱;;甘蔗β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆及分析[A];中國植物病理學(xué)會2011年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 張兆順;小麥β-1，，3-葡聚糖酶基因克隆及表達(dá)分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

2 邱紅林;轉(zhuǎn)幾丁質(zhì)酶基因和β-1，3-葡聚糖酶基因抗病棉花的安全評估研究[D];石河子大學(xué);2013年

3 黎柳君;青稞β-1，3-葡聚糖酶的純化、性質(zhì)及抗體制備[D];四川大學(xué);2006年

4 廖曉芬;擬南芥花藥特異表達(dá)的β-1，3-葡聚糖酶基因功能分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 丁平;青稞中β-1,3-葡聚糖酶分離純化及性質(zhì)研究[D];四川大學(xué);2003年

本文編號：2316369