【摘要】：【研究背景】脂肪移植技術(shù)因脂肪組織來源豐富,獲取方便,操作相對簡單、微創(chuàng),故在美容和修復(fù)重建領(lǐng)域得到越來越廣泛的應(yīng)用。然而,術(shù)后移植的脂肪容易出現(xiàn)脂肪結(jié)節(jié)、囊泡等并發(fā)癥,更因術(shù)后低且不穩(wěn)定的脂肪容積保有率(20 80%)嚴重制約了該技術(shù)進一步發(fā)展。2001年Zuk等學(xué)者第一次從人的脂肪組織中分離出具有多向分化能力的干細胞,命名為脂肪來源間充質(zhì)干細胞(ADSCS)。ADSCS具有轉(zhuǎn)分化為血管內(nèi)皮細胞和脂肪細胞的能力,具有抗組織細胞凋亡和促進移植物血管化的作用,因此利用ADSCS輔助自體脂肪移植能明顯降低脂肪結(jié)節(jié)、囊泡等并發(fā)癥的發(fā)生幾率,降低脂肪吸收率,進而提高移植脂肪成活質(zhì)量和長期容積保有率。然而,消瘦的患者缺乏可以獲得充足ADSCS的脂肪組織;ADSCS的分化與再生能力隨年齡的增加而減弱,故難以從老年患者體內(nèi)獲得高活力的ADSCS;糖尿病、紅斑狼瘡等自身免疫相關(guān)性疾病改變了該類患者ADSCS的細胞屬性,使其自身的ADSCS喪失了細胞保護和再生的功能。基于以上原因,傳統(tǒng)的ADSCS輔助脂肪移植術(shù)在消瘦的、老齡的、自身免疫相關(guān)性疾病的患者中無法有效展開。鑒于ADSCS具有低免疫性和免疫抑制能力,利用同種異基因充足、健康的ADSCS輔助自體脂肪移植可能是解決上述問題有效的方法。【研究目的】1、通過對Lewis和BN大鼠腹股溝皮下脂肪和附睪周圍脂肪組織的ADSCS獲取、培養(yǎng)、鑒定,探討哪個部位來源的ADSCS具有更高的生物活性。2、通過建立刀豆蛋白刺激脾單個核細胞(MNCs)增殖的模型,探究不同濃度的ADSCS對于MNCs增殖的影響;探討同基因和異基因ADSCS的低免疫原性和免疫抑制能力。3、建立BN大鼠來源的ADSCS輔助Lewis大鼠脂肪移植的動物模型,觀察同種異基因ADSCS是否降低了自體脂肪移植過程中的細胞損傷程度;是否促進移植脂肪的再血管化過程;是否提高了移植脂肪的長期容積保有率。并檢測了移植的同種異基因ADSCS和宿主間可能發(fā)生的免疫反應(yīng)。【研究方法】1、Lewis和BN大鼠的腹股溝皮下脂肪和附睪周圍脂肪通過酶消化法來分離和培養(yǎng)ADSCS,通過表面分子檢測和誘導(dǎo)分化鑒定其是否為ADSCS;并且測定兩種部位來源細胞的形態(tài)學(xué)、生長曲線、細胞周期。2、利用流式細胞分析儀檢測與免疫原性相關(guān)的細胞表面分子CD40、CD80、CD86、MHC-I、MHC-II;建立ADSCS與活化的MNCs共培養(yǎng)的細胞模型,檢測在此共培養(yǎng)體系中同基因和異基因ADSCS對脾單個核細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、以及CD4/CD25/Foxp3 Treg細胞比例的影響。3、建立BN大鼠來源的ADSCS輔助Lewis大鼠自體脂肪移植的動物模型。在脂肪移植術(shù)后7天和14天,檢測了HE組織染色、脂周蛋白、原位細胞凋亡等反映脂肪組織細胞損傷指標;進行了VEGF的ELAISA和CD34的免疫組織化學(xué)等反映移植組織血管化指標的檢測;進行了外周血CD4/CD8和CD4/CD25/Foxp3等反映免疫反應(yīng)指標的檢測。【結(jié)果】1、Lewis和BN大鼠獲取的ADSCS,無種屬上的明顯區(qū)別;但與腹股溝皮下脂肪相比,兩種大鼠附睪周圍脂肪組織的纖維組織更少,在進行剪碎脂肪操作時更加省時省力;附睪脂肪組織純度更高,單位質(zhì)量獲取的ADSCS的數(shù)量更多;而且附睪來源的ADSCS具有更早的貼壁時間,更佳的增殖能力和更短的傳代時間;綜上所述,附睪脂肪組織來源的ADSCS更加適合作為實驗細胞。2、流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn),ADSCS不表達CD40、CD80、CD84、MHC-II和中度表達MHC-I。在ADSCS與活化的MNCs共培養(yǎng)的細胞模型中,ADSCS明顯降低了MNCs的增殖,增加了處于G0/G1期的MNCs細胞比例;抑制了MNCs的凋亡;提高了具有負向免疫調(diào)節(jié)能力的CD4/CD25/Foxp3 Treg細胞的比例。3、在建立BN大鼠來源的ADSCS輔助Lewis大鼠脂肪移植的模型中,發(fā)現(xiàn)異基因和同基因ADSCS均能減輕移植術(shù)后7天、14天的脂肪細胞損傷與凋亡;增加移植物血管密度和血管內(nèi)皮生長因子的含量;提高術(shù)后3月時脂肪容積保有率。移植術(shù)后7天、14天的宿主外周血中CD4/CD8比值和CD4/CD25/Foxp3 Treg含量在異基因干細胞組和對照組之間并無統(tǒng)計學(xué)差異�！窘Y(jié)論】1、與腹股溝皮下脂肪相比,Lewis和BN大鼠附睪周圍脂肪來源的ADSCS獲取效率更高和增殖傳代能力更強。2、ADSCS具有低免疫原性和免疫抑制性。同基因和異基因ADSCS均能降低Lewis大鼠的已經(jīng)活化的MNCs增殖、抑制MNCs的細胞分裂、提高MNCs中CD4/CD25/Foxp3+Treg細胞的含量。但是并不促進MNCs凋亡的發(fā)生。3、在建立BN大鼠來源的ADSCS輔助Lewis大鼠脂肪移植的動物模型中,異基因ADSCS和同基因ADSCS一樣能夠降低術(shù)后7天、14天的細胞損傷和凋亡;促進移植物的血管化進程;提高移植脂肪組織的長期容積保有率;而且未發(fā)現(xiàn)異基因ADSCS引起的免疫排斥反應(yīng)。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R622

【參考文獻】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 解琳娜;小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞免疫學(xué)特性及其對急性移植物抗宿主病的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

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本文編號：2302164