發(fā)布時(shí)間：2018-10-24 14:10

【摘要】：目的克隆表達(dá)青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鑒定EmLDH重組蛋白的免疫原性,初步評(píng)價(jià)其免疫診斷價(jià)值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,將其連接入pET15b表達(dá)載體中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET15b-EmLDH,轉(zhuǎn)化至E.coli Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。通過SDS-PAGE檢測(cè)重組蛋白的表達(dá)形式,Ni-IDA樹脂親和層析純化重組蛋白。通過Western blotting法鑒定EmLDH重組蛋白的免疫原性,ELISA法檢測(cè)泡型包蟲病患者(57例)、囊型包蟲病患者(33例)和正常人(50例)血清,初步評(píng)價(jià)EmLDH重組蛋白的免疫診斷效果。結(jié)果成功克隆了EmLDH基因并表達(dá)純化出相應(yīng)的重組蛋白。Western blotting結(jié)果顯示,EmLDH重組蛋白可被泡型和囊型包蟲病患者血清識(shí)別,而不被正常人血清識(shí)別。ELISA結(jié)果顯示,EmLDH重組蛋白對(duì)泡型和囊型包蟲病患者血清的診斷敏感性分別為84.21%和84.85%。結(jié)論 EmLDH重組蛋白具有較高的免疫原性,對(duì)包蟲病具有較好的免疫診斷價(jià)值。
[Abstract]:Objective to clone and express the lactate dehydrogenase (lactate dehydrogenase,LDH) gene of Echinococcus multilocularis,Em in Qinghai province, identify the immunogenicity of EmLDH recombinant protein and evaluate its immunological diagnostic value. Methods the EmLDH gene was cloned by RT-PCR and ligated into the pET15b expression vector. The recombinant expression plasmid pET15b-EmLDH, was transformed into E.coli Rosetta (DE3)-receptive cells for induction expression. The expression of recombinant protein was detected by SDS-PAGE, and the recombinant protein was purified by Ni-IDA resin affinity chromatography. The immunogenicity of EmLDH recombinant protein was identified by Western blotting method. The serum samples of 57 patients with alveolar hydatid disease, 33 patients with cystic hydatid disease and 50 normal controls were detected by ELISA method. The immunological diagnostic effect of EmLDH recombinant protein was evaluated preliminarily. Results the EmLDH gene was cloned successfully and the corresponding recombinant protein. Western blotting was expressed and purified. The results showed that the recombinant EmLDH protein could be recognized by the sera of patients with vesicular and cystic hydatidosis. ELISA results showed that the diagnostic sensitivity of EmLDH recombinant protein to sera of patients with vesicular and cystic hydatidosis was 84.21% and 84.85%, respectively. Conclusion the recombinant EmLDH protein has high immunogenicity and has a good value for immunological diagnosis of hydatid disease.
【作者單位】： 青海大學(xué)生態(tài)環(huán)境工程學(xué)院;青海大學(xué)附屬醫(yī)院;
【基金】：青海省科技項(xiàng)目(No.2016-ZJ-746)資助~~
【分類號(hào)】：R383.33

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 康金鳳;傅玉才;馮新華;;棘球蚴囊液組成及抗原初步分析[J];新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1986年04期

2 K Furuya;潘煒;;建立多房棘球蚴的細(xì)胞系[J];地方病譯叢;1992年03期

3 李文姝,史大中;細(xì)粒棘球蚴和多房棘球蚴的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析[J];地方病通報(bào);2001年02期

4 洪凌仙,林宇光;狗和家貓感染多房棘球蚴后的成蟲發(fā)育比較和成蟲及原頭節(jié)的糖原分布[J];地方病通報(bào);1990年03期

5 荔童;吳向未;張永國;高亮亮;曹玉文;孫紅;張示杰;;抗骨橋蛋白抗體對(duì)沙鼠肝多房棘球蚴組織中的基質(zhì)金屬蛋白酶2和轉(zhuǎn)化生長因子β1的影響[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2013年06期

6 王成華;呂海龍;姜玉峰;彭心宇;張晶;;棘球蚴MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究進(jìn)展[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2013年01期

7 孫學(xué)勤,朱興全,竇蘭清,史曉紅,牛炳享;綿羊牦牛棘球蚴囊液及囊壁抗原的SDS-PAGE分析[J];中國人獸共患病雜志;1992年02期

8 袁曉園;腦包蟲模型:鼠腦多房棘球蚴的實(shí)驗(yàn)性感染[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊(cè));1999年02期

9 馬海長;吐爾洪江·吐遜;沙地克·阿帕爾;張雪;阿爾孜古麗·吐爾遜;楊樂;林仁勇;溫浩;;多房棘球蚴感染小鼠輔助Th17細(xì)胞,轉(zhuǎn)錄因子RORγτ及相關(guān)細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國病原生物學(xué)雜志;2014年08期

10 劉獻(xiàn)飛;王紅英;周曉濤;賈海英;劉曉霞;林仁勇;丁劍冰;;多房棘球蚴EM18基因片段的克隆與生物信息學(xué)預(yù)測(cè)[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2013年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊文川;;多房棘球蚴的病理學(xué)考察[A];中國動(dòng)物學(xué)會(huì)第七屆全國青年寄生蟲學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2002年

2 ;免疫學(xué)技術(shù)、方法[A];第七屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2010年

3 馬廣源;張建中;殷國榮;孟曉麗;劉紅麗;趙飛;;弓形蟲可溶性速殖子抗原的免疫原性蛋白質(zhì)組學(xué)分析[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 徐云升;;高危型HPV新型免疫原MAP的分子設(shè)計(jì)及其免疫原性鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集[C];2010年

5 陳兵;吳王月;劉寶英;徐靜;姜友昭;;人鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8強(qiáng)免疫原性片段的預(yù)測(cè)及原核表達(dá)鑒定[A];2010中國醫(yī)師協(xié)會(huì)內(nèi)分泌代謝科醫(yī)師分會(huì)年會(huì)論文匯編[C];2010年

6 吳雪瓊;張俊仙;李洪敏;姚光大;史迎昌;張靈霞;王一平;金關(guān)甫;韓永;;結(jié)核分支桿菌DNA疫苗免疫原性、保護(hù)效力和免疫治療作用的研究(摘要)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2002年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

7 趙慧;李娟;潘暉榕;林玉香;李少偉;李長貴;;重組人乳頭瘤病毒疫苗免疫原性評(píng)價(jià)方法的比較[A];2012年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

8 何卓晶;陶薇;洪艷;;含CpG基序質(zhì)粒的免疫作用機(jī)理及其應(yīng)用前景[A];浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)及醫(yī)學(xué)病毒學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

9 楊冬華;劉瑛;任雁;韓金樂;孫亮;尤鵬飛;葉祥忠;;凍干帶狀皰疹減毒活疫苗大鼠免疫原性[A];中國毒理學(xué)會(huì)第六屆全國毒理學(xué)大會(huì)論文摘要[C];2013年

10 白楊;張亞歷;王繼德;陳燁;張兆山;;幽門螺桿菌黏附素AlpA中四種黏附素保守區(qū)蛋白的制備及其免疫原性、安全性和黏附作用的體外評(píng)價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上冊(cè)）[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 何小周;多載體艾滋病疫苗序貫和重復(fù)免疫動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2017年

2 張圓;小鼠免疫抑制性受體LAIR-1分子的分布及功能的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 張s，

本文編號(hào)：2291632