【摘要】：目的克隆表達(dá)青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鑒定EmLDH重組蛋白的免疫原性,初步評(píng)價(jià)其免疫診斷價(jià)值。方法采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,將其連接入pET15b表達(dá)載體中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET15b-EmLDH,轉(zhuǎn)化至E.coli Rosetta(DE3)感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。通過SDS-PAGE檢測(cè)重組蛋白的表達(dá)形式,Ni-IDA樹脂親和層析純化重組蛋白。通過Western blotting法鑒定EmLDH重組蛋白的免疫原性,ELISA法檢測(cè)泡型包蟲病患者(57例)、囊型包蟲病患者(33例)和正常人(50例)血清,初步評(píng)價(jià)EmLDH重組蛋白的免疫診斷效果。結(jié)果成功克隆了EmLDH基因并表達(dá)純化出相應(yīng)的重組蛋白。Western blotting結(jié)果顯示,EmLDH重組蛋白可被泡型和囊型包蟲病患者血清識(shí)別,而不被正常人血清識(shí)別。ELISA結(jié)果顯示,EmLDH重組蛋白對(duì)泡型和囊型包蟲病患者血清的診斷敏感性分別為84.21%和84.85%。結(jié)論 EmLDH重組蛋白具有較高的免疫原性,對(duì)包蟲病具有較好的免疫診斷價(jià)值。
[Abstract]:Objective to clone and express the lactate dehydrogenase (lactate dehydrogenase,LDH) gene of Echinococcus multilocularis,Em in Qinghai province, identify the immunogenicity of EmLDH recombinant protein and evaluate its immunological diagnostic value. Methods the EmLDH gene was cloned by RT-PCR and ligated into the pET15b expression vector. The recombinant expression plasmid pET15b-EmLDH, was transformed into E.coli Rosetta (DE3)-receptive cells for induction expression. The expression of recombinant protein was detected by SDS-PAGE, and the recombinant protein was purified by Ni-IDA resin affinity chromatography. The immunogenicity of EmLDH recombinant protein was identified by Western blotting method. The serum samples of 57 patients with alveolar hydatid disease, 33 patients with cystic hydatid disease and 50 normal controls were detected by ELISA method. The immunological diagnostic effect of EmLDH recombinant protein was evaluated preliminarily. Results the EmLDH gene was cloned successfully and the corresponding recombinant protein. Western blotting was expressed and purified. The results showed that the recombinant EmLDH protein could be recognized by the sera of patients with vesicular and cystic hydatidosis. ELISA results showed that the diagnostic sensitivity of EmLDH recombinant protein to sera of patients with vesicular and cystic hydatidosis was 84.21% and 84.85%, respectively. Conclusion the recombinant EmLDH protein has high immunogenicity and has a good value for immunological diagnosis of hydatid disease.
【作者單位】： 青海大學(xué)生態(tài)環(huán)境工程學(xué)院;青海大學(xué)附屬醫(yī)院;
【基金】：青海省科技項(xiàng)目(No.2016-ZJ-746)資助~~
【分類號(hào)】：R383.33

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本文編號(hào)：2291632