【摘要】：【目的】核糖核酸酶III核酸內(nèi)切酶Dicer1是Micro RNA合成的關(guān)鍵酶之一,主要位于細胞胞質(zhì)中。在卵巢腫瘤的研究中,卵巢癌患者伴有Dicer1基因的異常調(diào)節(jié)往往提示預(yù)后不良。但是至今有關(guān)Dicer1基因如何影響卵巢癌的生物學特性和化療耐藥的研究并不是很清楚。因此本實驗的研究主要目的是在卵巢癌細胞株C13K中,下調(diào)Dicer1基因可以誘導(dǎo)自噬參與卵巢癌的化療耐藥的探索�！痉椒ā勘緦嶒炛饕膶嶒灧椒ㄊ�:(1)運用細胞增殖與毒性實驗(CCK8)來檢測下調(diào)Dicer1基因后卵巢癌細胞株C13K順鉑的敏感性及半數(shù)抑制濃度(IC50)。(2)利用小干擾RNA(si RNA)技術(shù)進行下調(diào)卵巢癌細胞株C13K中的Dicer1基的表達量和下調(diào)Dicer1基因后對順鉑的敏感性以及加入抑制自噬的藥物(3-MA)后是否逆轉(zhuǎn)這種耐藥效應(yīng),其次通過蛋白質(zhì)印記(western blot)觀察Dicer1和自噬相關(guān)的關(guān)鍵基因(ATG5,LC3B)在下調(diào)Dicer1基因后卵巢癌細胞株C13K的表達量以及下調(diào)Dicer1基因并且順鉑處理后凋亡蛋白(Caspase3,c-PARP)的表達量。(3)通過透射電子顯微鏡及共聚焦激光掃描顯微鏡技術(shù),來觀察Dicer1基因下調(diào)以及順鉑處理后卵巢癌細胞的自噬體的變化。(4)通過流式細胞學實驗技術(shù),來觀察Dicer1-si,ATG5-si以及順鉑處理后細胞凋亡的情況。(5)通過運用公共數(shù)據(jù)庫TCGA,我們研究了Dicer1基因和ATG5基因在卵巢癌病人中的表達與預(yù)后的關(guān)系�！窘Y(jié)果】根據(jù)以上實驗數(shù)據(jù)及現(xiàn)象,可以得到如下結(jié)果:(1)通過CCK8發(fā)現(xiàn)卵巢癌細胞株C13K在Dicer1基因下調(diào)后對化療藥物順鉑的耐藥性增加。(2)通過si RNA干擾和western blot發(fā)現(xiàn)下調(diào)Dicer1基因在卵巢癌細胞株(C13K)的表達后,凋亡蛋白(Caspase3,c-PARP)表達也降低且加入自噬抑制劑(3MA)可以逆轉(zhuǎn)這種耐藥效應(yīng)。(3)通過透射電子顯微鏡和熒光共聚焦激光掃描顯微鏡發(fā)現(xiàn)Dicer1下調(diào)后以及順鉑處理后,自噬現(xiàn)象比較明顯。(4)在TCGA數(shù)據(jù)庫中,發(fā)現(xiàn)Dicer1基因表達量低的患者預(yù)后較差,自噬基因(ATG5)表達量高的患者預(yù)后不良。(5)我們把自噬形成的關(guān)鍵基因(ATG5)沉默以及使用藥物抑制自噬生成后,發(fā)現(xiàn)C13K對順鉑的敏感性增加�！窘Y(jié)論】通過以上實驗數(shù)據(jù)的結(jié)果分析,我們可以得出一個這樣的結(jié)論即在卵巢癌細胞株C13K中,Dicer1下調(diào)可以誘導(dǎo)自噬的發(fā)生進而促進卵巢癌細胞對化療藥物順鉑的耐藥,也許可以為我們以后的臨床實踐提供一種新的治療策略。
[Abstract]:[objective] ribonuclease III endonuclease Dicer1 is one of the key enzymes in the synthesis of Micro RNA, mainly in the cytoplasm of cells. In the study of ovarian neoplasms, ovarian cancer patients with abnormal regulation of Dicer1 gene often suggest poor prognosis. However, it is not clear how the Dicer1 gene affects the biological characteristics and chemotherapeutic resistance of ovarian cancer. Therefore, the main purpose of this study was to study in ovarian cancer cell line C13K, Down-regulation of Dicer1 gene can induce autophagy to participate in chemotherapeutic resistance of ovarian cancer. [methods] the main experimental methods in this experiment are as follows: (1) the cell proliferation and toxicity test (CCK8) was used to detect the C13K cis-sequence of ovarian cancer cell line after down-regulation of Dicer1 gene. Platinum sensitivity and half inhibitory concentration (IC50). (_ 2) using small interfering RNA (si RNA) technique to down-regulate the expression of Dicer1 in ovarian cancer cell line C13K and the sensitivity of Dicer1 gene to cisplatin and whether to add an anti-autophagy drug (3-MA) Reversing the drug resistance effect, Secondly, the expression of Dicer1 and autophagy related key gene (ATG5,LC3B) in ovarian cancer cell line C13K after down-regulation of Dicer1 gene and the expression of apoptotic protein (Caspase3,c-PARP) after down-regulation of Dicer1 gene and cisplatin treatment were observed by protein imprinted (western blot). (3) the expression of apoptotic protein (Caspase3,c-PARP) in ovarian cancer cell line after down-regulation of Dicer1 gene. Electron microscopy and confocal laser scanning microscopy, To observe the Dicer1 gene down-regulation and cisplatin treatment of ovarian cancer cells autophagy changes. (4) flow cytology, (5) by using common database TCGA, we studied the relationship between the expression of Dicer1 gene and ATG5 gene and prognosis in patients with ovarian cancer. [results] based on the above experimental data and phenomena, we studied the relationship between the expression of Dicer1 gene and ATG5 gene in patients with ovarian cancer. The results were as follows: (1) the chemotherapeutic drug resistance of ovarian cancer cell line C13K was increased after the down-regulation of Dicer1 gene by CCK8. (2) the expression of Dicer1 gene in ovarian cancer cell line (C13K) was down-regulated by si RNA interference and western blot. The expression of apoptotic protein (Caspase3,c-PARP) was also decreased and the drug resistance was reversed by the addition of autophagy inhibitor (3MA). (3) the down-regulation of Dicer1 and cisplatin treatment were observed by transmission electron microscopy and fluorescence confocal laser scanning microscope. Autophagy was more obvious. (4) in TCGA database, patients with low Dicer1 gene expression had poor prognosis. The prognosis of patients with high expression of autophagy gene (ATG5) was poor. (5) after silencing autophagy key gene (ATG5) and inhibiting autophagy with drugs, we found that C13K was more sensitive to cisplatin. [conclusion] based on the results of the above experimental data, we found that C13K was more sensitive to cisplatin. We can conclude that in ovarian cancer cell line C13K, down-regulation of Dicer1 induces autophagy and promotes the chemotherapeutic drug resistance of ovarian cancer cells to cisplatin. It may provide a new treatment strategy for our future clinical practice.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31

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本文編號：2278611