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家蠶絲腺因子SGF-1的基因克隆及序列結(jié)構(gòu)和表達特征與亞細胞定位

發(fā)布時間:2018-10-15 08:35
【摘要】:Fox類轉(zhuǎn)錄因子在細胞生長、增殖、分化和胚胎發(fā)育等過程中發(fā)揮重要功能,SGF-1是家蠶絲腺細胞轉(zhuǎn)錄因子,屬于Fox類轉(zhuǎn)錄因子家族。家蠶SGF-1(BGIBMGA005101-TA)基因位于第25號染色體nscaf2823:112743~113792(+strand),含有1個外顯子,CDS全長1 050 bp,編碼349個氨基酸。家蠶品種大造5齡第3天幼蟲的基因芯片表達譜顯示,SGF-1基因在大多數(shù)組織中有表達,在絲腺中高量表達,其中在前部和中部絲腺的表達量略高于后部絲腺,在雄蠶中的表達量略高于雌蠶。氨基酸組成分析顯示,SGF-1蛋白富含脯氨酸、絲氨酸、丙氨酸和亮氨酸,且多數(shù)為親水性氨基酸。序列結(jié)構(gòu)分析表明,SGF-1包含典型的Forkhead結(jié)構(gòu)域,其兩端分別為Forkhead_N末端結(jié)構(gòu)域和HNF3_C末端結(jié)構(gòu)域,其中大多數(shù)氨基酸殘基形成了無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu),α-螺旋與β-折疊結(jié)構(gòu)分別約占18.0%和0.6%。從家蠶后部絲腺克隆了SGF-1基因,并構(gòu)建麥芽糖結(jié)合蛋白標(biāo)簽融合表達載體,表達并純化了重組SGF-1蛋白。通過RT-PCR與Western blotting檢測分別從基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)表達水平上證實,SGF-1在家蠶5齡第3天幼蟲絲腺中高量表達。亞細胞定位實驗顯示SGF-1定位于細胞核中。這些結(jié)果為深入研究SGF-1的結(jié)構(gòu)和功能提供了有益的基礎(chǔ)信息。
[Abstract]:Fox transcription factors play an important role in cell growth, proliferation, differentiation and embryonic development. SGF-1 is a transcription factor of silkworm gland cells and belongs to the family of Fox transcription factors. The SGF-1 (BGIBMGA005101-TA) gene of Bombyx mori (Bombyx mori) is located on chromosome 25, nscaf2823:112743~113792 (strand), contains one exon, and the CDS length of 1 050 bp, encodes 349 amino acids. The microarray analysis of the 3rd day larva of the 5th instar of silkworm variety showed that the SGF-1 gene was expressed in most tissues and high in the silk gland. The expression of SGF-1 gene in the anterior and middle silk gland was slightly higher than that in the posterior silk gland. The expression level in male silkworm was slightly higher than that in female silkworm. Amino acid composition analysis showed that SGF-1 protein was rich in proline, serine, alanine and leucine, and most of them were hydrophilic amino acids. Sequence analysis showed that SGF-1 contained a typical Forkhead domain, with Forkhead_N terminal domain and HNF3_C terminal domain at both ends. Most of the amino acid residues formed irregularly curled structures, and 偽 -helix and 尾 -fold structures accounted for 18.0% and 0.6%, respectively. The SGF-1 gene was cloned from the posterior silk gland of Bombyx mori and the fusion expression vector of maltose binding protein label was constructed. The recombinant SGF-1 protein was expressed and purified. The results of RT-PCR and Western blotting showed that SGF-1 was highly expressed in the silk gland of silkworm larvae on the 3rd day of 5th instar of silkworm from the level of gene transcription and protein expression. Subcellular localization assay showed that SGF-1 was located in the nucleus. These results provide useful basic information for further study of the structure and function of SGF-1.
【作者單位】: 西南大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院重慶市蠶絲纖維新材料工程技術(shù)研究中心;家蠶基因組生物學(xué)國家重點實驗室西南大學(xué);
【基金】:國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃“973”項目(No.2012CB1146-02) 國家自然科學(xué)基金項目(No.31402139) 中央高;究蒲袠I(yè)務(wù)費項目(No.XDJK2013C049;XDJK2013A019) 西南大學(xué)博士基金項目(No.SWU112086;SWU112111)
【分類號】:S881.24;Q78

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3 呂家,

本文編號:2271972


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