【摘要】：在轉(zhuǎn)錄組unigene序列基礎(chǔ)上,結(jié)合RACE技術(shù),從羅漢果總RNA中克隆乙烯合成關(guān)鍵酶-1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸合成酶1(ACS1)全長cDNA,同時(shí),應(yīng)用hi TAIL PCR技術(shù)獲得Sg ACS1的DNA全長。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測該基因在雄株、雌株以及Ag~+處理后的雌株在取/授粉前后的葉、莖、芽、花蕾、花中的相對(duì)表達(dá)量。克隆得到1 749 bp的cDNA全長,最長開放閱讀框?yàn)? 530 bp,編碼509個(gè)氨基酸,命名為Sg ACS1(GenBank登錄號(hào)為KX620760),編碼蛋白與同源物種苦瓜的相應(yīng)蛋白序列相似性為86%,該蛋白具有磷酸吡哆醛轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)氨酶結(jié)合結(jié)構(gòu)域,屬于天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶家族;獲得Sg ACS1的DNA全長為3 245 bp,其中含有3個(gè)內(nèi)含子,該內(nèi)含子和5'UTR含有多個(gè)高水平轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子、激素響應(yīng)元件和環(huán)境脅迫相關(guān)的作用元件,暗示該基因參與轉(zhuǎn)氨反應(yīng)、生物體內(nèi)乙烯的合成代謝等生物學(xué)過程,并且與其他激素共同發(fā)揮作用維持機(jī)體的正常生命活動(dòng)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明,Sg ACS1在羅漢果各個(gè)部位和時(shí)期均有表達(dá),其中在授粉后的雌株花蕾中相對(duì)表達(dá)量最高,其次是授粉前后雌株的花和取粉前后雄株的芽,而Ag~+處理后的雌株在授粉后的花蕾和芽中的相對(duì)表達(dá)量最低,說明該暗示羅漢果Sg ACS1參與花芽形成、雄蕊原基分化、蕾中雄蕊發(fā)育以及雌花形成,Sg ACS1在雌株蕾中受到授粉或銀離子誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá)。
[Abstract]:On the basis of transcriptome UniGene sequence and RACE technique, the full-length cDNA of the key enzyme of ethylene synthesis - 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid synthase 1 (ACS1) was cloned from grosvenorii total RNA, and the full-length of Sg ACS1 was obtained by hi-TAIL PCR. 1 749 BP cDNA was cloned from leaves, stems, buds, buds and flowers before and after pollination. The longest open reading frame was 1 530 BP and encoded 509 amino acids. It was named Sg ACS1 (GenBank login number KX620760), and the sequence similarity of the encoded protein was 86% with that of the homologous bitter gourd. Transferase domain and transaminase binding domain belong to aspartate aminotransferase family; the total length of DNA obtained from Sg ACS1 is 3 245 bp, which contains three introns. The intron and 5'UTR contain many high-level transcription regulators, hormone response elements and environmental stress-related elements, suggesting that the gene is involved in transamination reaction, organisms. Real-time fluorescence quantitative PCR showed that Sg ACS1 was expressed in all parts and stages of grosvenoria grosvenorii, and the relative expression of Sg ACS1 was the highest in the female buds after pollination, followed by the flowers of the female plants before and after pollination. The relative expression of Sg ACS1 in the buds and buds of male plants before and after pollination was the lowest, indicating that Sg ACS1 was involved in flower bud formation, stamen primordium differentiation, stamen development and female flower formation. Sg ACS1 was up-regulated by pollination or silver ion in female buds.
【作者單位】： 廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院;廣西藥用植物園廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;九江市第三人民醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31260359) 廣西大學(xué)博士啟動(dòng)項(xiàng)目(XBZ110586)共同資助
【分類號(hào)】：S668.9;Q943.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2227226