【摘要】：【目的】Sox家族是一類(lèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,在多細(xì)胞動(dòng)物的發(fā)育過(guò)程中起到了極其重要的作用。本研究旨在獲得家蠶Bombyx mori Sox家族基因,并分析其在幼蟲(chóng)不同組織和發(fā)育階段的表達(dá)模式及功能�！痉椒ā坎捎胏DNA末端快速擴(kuò)增方法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆家蠶Sox家族基因,并對(duì)其序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。構(gòu)建原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)原核表達(dá)并得到其蛋白的多克隆抗體,并以Western blot驗(yàn)證其蛋白在家蠶胚胎發(fā)育時(shí)期(產(chǎn)卵后24,48,72,96,120,144,168,192和216 h)和蟻蠶的表達(dá)特征。同時(shí),使用半定量RT-PCR技術(shù)分析這一基因在家蠶整個(gè)發(fā)育過(guò)程以及5齡第3天幼蟲(chóng)不同組織(精巢、卵巢、神經(jīng)節(jié)、頭部、絲腺、脂肪體、馬氏管、中腸、后腸、表皮、血液、氣管)中的表達(dá)譜。【結(jié)果】克隆獲得一個(gè)家蠶Sox家族基因,將其命名為BmDichaete(Gen Bank登錄號(hào):KY914554),其cDNA序列全長(zhǎng)為1 541 bp,開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)741 bp,編碼246個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量大小為27.3 kD,等電點(diǎn)為9.89。同源序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,BmDichaete具有Sox家族的典型HMG結(jié)構(gòu)域,并與其他鱗翅目昆蟲(chóng)的Dichaete蛋白具有較高的同源性。對(duì)其表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn),BmDichaete在家蠶整個(gè)發(fā)育時(shí)期都有表達(dá),從胚胎發(fā)育后期到蛹前期持續(xù)高表達(dá),在蛹后期及成蟲(chóng)期表達(dá)量有所下降,并且該基因在家蠶5齡第3天幼蟲(chóng)的卵巢、頭部、絲腺及后腸組織中顯著高表達(dá)。Western blot分析結(jié)果顯示,BmDichaete在家蠶胚胎發(fā)育過(guò)程中持續(xù)而穩(wěn)定地表達(dá)�！窘Y(jié)論】家蠶BmDichaete具有典型HMG結(jié)構(gòu)域,屬于Sox家族成員。BmDichaete在家蠶胚胎發(fā)育的各個(gè)時(shí)期都發(fā)揮作用。本研究為進(jìn)一步探索該基因在家蠶中的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: Sox family is a class of transcriptional regulators, which plays an important role in the development of multicellular animals. The purpose of this study was to obtain Bombyx mori Sox family genes of Bombyx mori, and to analyze their expression patterns and functions in different tissues and developmental stages of larvae. [methods] the Sox family genes of Bombyx mori were cloned by cDNA terminal rapid amplification method (rapid amplification of cDNA ends,RACE). The sequence was analyzed by bioinformatics. The prokaryotic expression vector was constructed to induce the prokaryotic expression and the polyclonal antibody of the protein was obtained. The Western blot was used to verify the expression characteristics of the protein during the embryonic development of Bombyx mori (24: 48 / 721 / 96120144168192 and 216 h after oviposition) and in ant silkworm (Bombyx mori). At the same time, semi-quantitative RT-PCR technique was used to analyze the different tissues (spermary, ovary, ganglion, head, silk gland, fat body, Markov duct, midgut, hindgut, epidermis, blood) of silkworm (Bombyx mori) during the whole development process and the 3rd day of the 5th instar (spermary, ovary, ganglion, head, silk gland, fat body). [results] A silkworm Sox family gene was cloned and named as BmDichaete (Gen Bank accession number: KY914554). Its cDNA sequence was 1 541 bp, open reading frame 741 bp, encoding 246 amino acids. The predicted molecular weight of 27.3 kD, isoelectric point is 9.89. Homologous sequence alignment and phylogenetic analysis showed that BmDichaete had a typical HMG domain of the Sox family and had high homology with the Dichaete proteins of other Lepidoptera insects. The expression pattern of BmDichaete was found to be highly expressed in silkworm during the whole development period, from the later stage of embryonic development to the early stage of pupae, and the expression level of BmDichaete was decreased in the later stage of pupae and adult stage, and the expression of BmDichaete gene was found in the ovary of the 5th instar larvae of Bombyx mori on the 3rd day of silkworm. The results of Western blot analysis showed that BmDichaete was continuously and stably expressed in the embryonic development of Bombyx mori. [conclusion] Silkworm BmDichaete has a typical HMG domain. BmDichaete, a member of the Sox family, plays an important role in the development of silkworm embryos. This study laid a foundation for further exploring the function of this gene in silkworm.
【作者單位】： 西南大學(xué)家蠶基因組生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;西南大學(xué)農(nóng)業(yè)部蠶桑生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31472152,31572466)
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;S881.2

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本文編號(hào)：2214391