【摘要】：Zn_2Cys_6家族轉(zhuǎn)錄因子是鋅簇家族轉(zhuǎn)錄因子中的C6型轉(zhuǎn)錄因子,是真菌比較常見的一類轉(zhuǎn)錄因子。該家族轉(zhuǎn)錄因子最早的研究是釀酒酵母中的GAL4基因,在稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)和禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)等植物病原真菌中也有比較多的研究。研究發(fā)現(xiàn)該類轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控病菌的致病性、產(chǎn)孢量和病原菌的生長等生命過程。蕓薹生鏈格孢(Alternaria brassicicola)是引起十字花科植物黑斑病的病原菌,給農(nóng)民帶來了比較嚴重的經(jīng)濟損失。目前,對于蕓薹生鏈格孢(A.brassicicola)致病機制尚不明確,研究發(fā)現(xiàn)Zn_2Cys_6家族轉(zhuǎn)錄因子參與多種植物病原真菌的致病過程,且在蕓薹生鏈格孢(A.brassicicola)研究較少,因此進行深入的研究就有助于我們認識該菌的致病機制。在本研究中,我們根據(jù)稻瘟病菌中Zn_2Cys_6家族MoNIT4基因,尋找到了其在蕓薹生鏈格孢(A.brassicicola)中的同源基因ZnCys_Ab0012。據(jù)據(jù)同源重組的原理,采用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化的方法,得到了ZnCys_Ab0012基因突變體,從而對蕓薹生鏈格孢(A.brassicicola)中ZnCys_Ab0012基因的功能進行研究。通過ZnCys_Ab0012基因缺失突變體與野生菌對比研究發(fā)現(xiàn),ZnCys_Ab0012基因缺失突變體的生長速度是野生菌生長速度的1.96倍。通過對兩種菌表型的觀察發(fā)現(xiàn),野生菌的生長以埋生菌絲為主,而ZnCys_Ab0012基因缺失突變體以氣生菌絲的生長為主,且菌落顏色差異很大,ZnCys_Ab0012基因缺失突變體呈灰白色,而野生菌為深綠色。通過對于油菜的接種實驗發(fā)現(xiàn),ZnCys_Ab0012基因缺失突變體接種的油菜沒有表現(xiàn)出對葉片的致病性。通過對培養(yǎng)的菌株進行顯微鏡觀察,我們發(fā)現(xiàn),ZnCys_Ab0012基因缺失突變體菌株在顯微鏡下沒有觀察到孢子存在。同時通過對于穿透能力以及抗逆境生長能力的研究發(fā)現(xiàn),ZnCys_Ab0012基因缺失突變體與野生菌沒有很明顯的區(qū)別。綜上所述,ZnCys_Ab0012基因能夠控制病原菌的產(chǎn)孢量,同時對于病原菌的生長速度以及致病性造成比較明顯的影響。同時對于病原菌的穿透力以及逆境生長的能力影響相對較小。
[Abstract]:Zn_2Cys_6 family transcription factors are C6 type transcription factors in zinc cluster family, and they are common transcription factors in fungi. GAL4 gene in Saccharomyces cerevisiae is the earliest study of transcription factors in this family. There are also many studies on the pathogen fungi such as (Magnaporthe oryzae) and (Fusarium graminearum) of rice blast and Fusarium graminearum. It was found that these transcription factors were involved in controlling the pathogenicity, sporulation and growth of pathogenic bacteria. Alternaria brassica (Alternaria brassicicola) is a pathogen causing black spot of cruciferous plants, which brings serious economic losses to farmers. At present, the pathogenetic mechanism of A.brassicicola in brassica is not clear. It was found that the transcription factors of Zn_2Cys_6 family were involved in the pathogenicity of many plant pathogenic fungi, and there were few studies on A.brassicicola in brassica. Therefore, in-depth study will help us to understand the pathogenic mechanism of the bacteria. In this study, based on the MoNIT4 gene of Zn_2Cys_6 family in rice blast fungus, we found the homologous gene ZnCys_Ab0012. in the brassica Alternaria (A.brassicicola). According to the principle of homologous recombination, ZnCys_Ab0012 gene mutants were obtained by protoplast transformation, and the function of ZnCys_Ab0012 gene in A.brassicicola was studied. It was found that the growth rate of the ZnCys_Ab0012 gene deletion mutant was 1.96 times faster than that of the wild strain. By observing the phenotypes of the two strains, it was found that the growth of wild bacteria was mainly buried hyphae, while that of ZnCys_Ab0012 gene deletion mutant was mainly airborne hyphae, and the colony color difference was very different, and the mutant of ZnCysAb0012 gene deletion was grayish white. Wild fungi are dark green. It was found that rape inoculated with Zn-CysAb0012 gene deletion mutant did not show pathogenicity to leaves. By microscopic observation of the cultured strain, we found that no spore was found in the strain with deletion of ZnCysAb0012 gene. At the same time, it was found that there was no significant difference between ZnCysS Ab0012 gene deletion mutants and wild bacteria through the study of penetration ability and resistance to stress growth. In conclusion, ZnCysAb0012 gene can control the sporulation of pathogenic bacteria, and has a significant effect on the growth rate and pathogenicity of pathogenic bacteria. At the same time, it had little effect on the permeability of pathogens and the ability of growth under stress.
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S432.4

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本文編號：2210164