【摘要】：目的:為了建立GTPBP4基因沉默的人結(jié)腸癌細(xì)胞株,研究GTPBP4基因?qū)θ私Y(jié)腸癌細(xì)胞株RKO細(xì)胞增殖和凋亡的影響,構(gòu)建并鑒定GTPBP4基因RNA干擾慢病毒載體。方法:針對GTPBP4 mRNA設(shè)計siRNA,構(gòu)建pGCSIL-GFPGTPBP4慢病毒載體,感染293T細(xì)胞,包裝產(chǎn)生慢病毒,并進(jìn)行滴度測定。將慢病毒轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌細(xì)胞株RKO,通過Realtime PCR和Western Blot分析GTPBP4基因敲減效率。結(jié)果:結(jié)果顯示,插入DNA序列與目的基因序列一致,提示插入人GTPBP4基因序列正確。293T細(xì)胞中病毒滴度的測定結(jié)果 2×108 TU/m L。經(jīng)siRNA慢病毒感染后,實驗組RKO GTPBP4基因mRNA水平表達(dá)量受到顯著抑制,Western Blot結(jié)果顯示敲減效率達(dá)到72.9%。結(jié)論:GTPBP4基因RNAi慢病毒載體構(gòu)建成功,可用于結(jié)腸癌生物行為等各方面的研究。
[Abstract]:Aim: to establish a human colon cancer cell line silenced by GTPBP4 gene, to study the effect of GTPBP4 gene on the proliferation and apoptosis of human colon cancer cell line RKO, and to construct and identify the GTPBP4 gene RNA interfering lentivirus vector. Methods: pGCSIL-GFPGTPBP4 lentivirus vector was constructed according to GTPBP4 mRNA, infected 293T cells, packaged to produce lentivirus, and its titer was determined. Lentivirus was transfected into human colon cancer cell line RKO.The efficiency of GTPBP4 gene knockdown was analyzed by Realtime PCR and Western Blot. Results: the results showed that the inserted DNA sequence was the same as the target gene sequence, indicating that the virus titer of the inserted human GTPBP4 gene was correct. 293T cells showed that the titer of the virus was 2 脳 10 ~ 8 TU/m / L. After infection with siRNA lentivirus, the expression of RKO GTPBP4 gene mRNA in the experimental group was significantly inhibited. Western Blot showed that the knockout efficiency was 72.9%. Conclusion the RNAi lentivirus vector of the RNAi gene of the 10% GTPBP4 gene is successfully constructed and can be used in the study of biological behavior of colon cancer.
【作者單位】： 西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科;
【基金】：四川省科技廳科技計劃項目(NO:14JC0091) 瀘州市科技局科技計劃項目(2013 LZLY-J44)
【分類號】：R735.35

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9 張U，

本文編號：2179406