發(fā)布時(shí)間：2018-08-10 19:58

【摘要】：[目的]構(gòu)建小鼠鐵蛋白輕鏈(ferritin light chain,FTL)的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)真核表達(dá)載體并檢測其表達(dá)。[方法]利用PCR擴(kuò)增技術(shù)得到小鼠560 bp的FTL基因編碼序列,將此序列插入到含有增強(qiáng)型綠色熒光基因EGFP的真核表達(dá)載體PEGFP/N1多克隆位點(diǎn)區(qū)域中的限制內(nèi)切酶HindⅢ和Bam HⅠ之間,得到真核表達(dá)載體m FTL-PEGFP/N1。經(jīng)酶切和測序鑒定后,將構(gòu)建成功的m FTL-PEGFP/N1及其對照空載體PEGFP/N1分別轉(zhuǎn)染到小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞中,提取蛋白后利用免疫印跡技術(shù)檢測細(xì)胞中帶有PEGFP標(biāo)簽的FTL蛋白的表達(dá)。[結(jié)果]新構(gòu)建的m FTL-PEGFP/N1重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定得到預(yù)期片段,進(jìn)一步的測序結(jié)果顯示所構(gòu)建的重組質(zhì)粒中插入的小鼠FTL基因的c DNA序列正確。[結(jié)論]利用分子克隆技術(shù)獲得了帶有綠色熒光蛋白標(biāo)簽的小鼠鐵蛋白輕鏈真核表達(dá)載體m FTL-PEGFP/N1,并在細(xì)胞中表達(dá)良好。
[Abstract]:[objective] to construct the eukaryotic expression vector of enhanced green fluorescent protein (enhanced green fluorescent) and detect its expression in mouse ferritin light chain (ferritin light). [methods] the 560bp FTL gene encoding sequence of mice was obtained by PCR amplification and inserted into the region of restriction endonuclease Hind 鈪，

本文編號：2176041