【摘要】：[目的]構建小鼠鐵蛋白輕鏈(ferritin light chain,FTL)的增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)真核表達載體并檢測其表達。[方法]利用PCR擴增技術得到小鼠560 bp的FTL基因編碼序列,將此序列插入到含有增強型綠色熒光基因EGFP的真核表達載體PEGFP/N1多克隆位點區(qū)域中的限制內(nèi)切酶HindⅢ和Bam HⅠ之間,得到真核表達載體m FTL-PEGFP/N1。經(jīng)酶切和測序鑒定后,將構建成功的m FTL-PEGFP/N1及其對照空載體PEGFP/N1分別轉(zhuǎn)染到小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7細胞中,提取蛋白后利用免疫印跡技術檢測細胞中帶有PEGFP標簽的FTL蛋白的表達。[結果]新構建的m FTL-PEGFP/N1重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定得到預期片段,進一步的測序結果顯示所構建的重組質(zhì)粒中插入的小鼠FTL基因的c DNA序列正確。[結論]利用分子克隆技術獲得了帶有綠色熒光蛋白標簽的小鼠鐵蛋白輕鏈真核表達載體m FTL-PEGFP/N1,并在細胞中表達良好。
[Abstract]:[objective] to construct the eukaryotic expression vector of enhanced green fluorescent protein (enhanced green fluorescent) and detect its expression in mouse ferritin light chain (ferritin light). [methods] the 560bp FTL gene encoding sequence of mice was obtained by PCR amplification and inserted into the region of restriction endonuclease Hind 鈪，

本文編號：2176040