【摘要】：針對(duì)目前轉(zhuǎn)基因(GM)產(chǎn)品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)分子的缺乏,構(gòu)建適用于轉(zhuǎn)基因水稻的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子pMDSPS和pMDTheli,其中包含水稻內(nèi)源基因SPS通用序列,耐鹽基因ThST3和Ubiquitin啟動(dòng)子序列的構(gòu)建特異性Theli序列。對(duì)其特異性及制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性進(jìn)行鑒定研究,研究結(jié)果顯示,在進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增時(shí),采用質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子為陽(yáng)性對(duì)照,均能特異擴(kuò)增目的條帶。以標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線,SPS基因的定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)平均為0.9993,PCR擴(kuò)增效率在1.0004~1.034之間;ThST3基因的定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)平均為0.9937,PCR擴(kuò)增效率在0.9358~0.9486之間。因此,構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)分子pMDSPS和pMDTheli既能作為普通PCR的陽(yáng)性對(duì)照,也能用于定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建,為轉(zhuǎn)基因水稻的定量檢測(cè)提供簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉的標(biāo)準(zhǔn)分子打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:In view of the lack of standard molecules for the detection of transgenic (GM) products, the standard plasmid molecules pMDSPS and pMDTheli, which are suitable for transgenic rice, are constructed, which contain the common SPS sequence of rice endogenous gene. Construction of specific Theli sequence of salt tolerant gene ThST3 and Ubiquitin promoter. The specificity and reliability of the preparation standard curve were studied. The results showed that the target bands could be amplified by using plasmid standard molecule as positive control. The correlation coefficient of the quantitative standard curve of SPS gene constructed from standard plasmid molecule was 0.9993H PCR amplification efficiency between 1.00041.034 and 0.9937%. The average PCR amplification efficiency of ThST3 gene was between 0.9358and 0.9486. Therefore, the constructed standard molecule pMDSPS and pMDTheli can be used not only as positive control of ordinary PCR, but also in the construction of quantitative standard curve, which provides a simple and inexpensive standard molecule for quantitative detection of transgenic rice.
【作者單位】： 農(nóng)業(yè)部農(nóng)作物種子質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(深圳)/深圳市農(nóng)業(yè)科技促進(jìn)中心;
【基金】：深圳市技術(shù)創(chuàng)新項(xiàng)目(CXZZ20120614165508810) 轉(zhuǎn)基因新品種培育重大專項(xiàng)(2009ZX08001-023B)
【分類號(hào)】：S511

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本文編號(hào)：2171851