【摘要】：為鑒定多頭帶絳蟲蛋白激酶A催化亞基(Tm PKA-C)基因作為診斷抗原的潛能,本試驗以多頭帶絳蟲成蟲RNA為模板,利用RT-PCR擴增Tm PKA-C基因。將Tm PKA-C基因片段連接至p ET-30a原核表達載體進行原核表達,然后利用Western blotting和間接ELISA分析該蛋白的反應原性。結果表明,Tm PKA-C基因開放閱讀框的長度為1 032 bp,可編碼343個氨基酸。Tm PKA-C基因的表達產(chǎn)物主要以包涵體的形式存在,重組蛋白的分子質量大小約42 ku。Western blotting結果表明,該重組蛋白既能與自然感染腦多頭蚴的綿羊血清發(fā)生特異性反應,又能與人工感染腦多頭蚴不同時間段的綿羊血清發(fā)生特異性反應,表明該重組蛋白具有良好的反應原性。間接ELISA分析結果表明,腦多頭蚴綿羊血清能與重組蛋白發(fā)生特異性反應,進一步證明該重組蛋白的反應原性良好。本研究為篩選腦多頭蚴病診斷新抗原奠定了基礎。
[Abstract]:In order to identify the potential of protein kinase A catalytic subunit (TM PKA-C) gene of Taenia multiceps as diagnostic antigen, the TM PKA-C gene was amplified by RT-PCR using RNA of Taenia multiceps as template. The TM PKA-C gene fragment was ligated into the prokaryotic expression vector of p ET-30a for prokaryotic expression, and the reactivity of the protein was analyzed by Western blotting and indirect ELISA. The results showed that the length of the open reading frame of Tm PKA-C gene was 1 032 BP, and the expression products of the gene encoding 343 amino acids. TM PKA-C mainly existed in the form of inclusion bodies. The molecular weight of the recombinant protein was about 42 ku.Western blotting. The recombinant protein can react with both sheep serum infected naturally and sheep sera infected with cerebrum polycaria at different time points, which indicates that the recombinant protein has good reactivity. The results of indirect ELISA analysis showed that the specific reaction between the recombinant protein and the serum of cerebral polycaria sheep was specific, which further proved that the reactivity of the recombinant protein was good. This study laid a foundation for screening new antigens for the diagnosis of cerebral polycephalosis.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原生物學國家重點實驗室 農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)公共衛(wèi)生重點開放實驗室 甘肅省動物寄生蟲病重點實驗室;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：甘肅省自然科學基金(1506RJZA152)
【分類號】：S852.734

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