【摘要】：依據(jù)乳酸菌的腸道益生作用,選擇產(chǎn)氣莢膜梭菌關(guān)鍵致病因子α毒素/磷脂酶C為抗原,構(gòu)建產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素去除信號肽的plc基因片段重組植物乳桿菌,利用植物乳酸菌穿梭載體pSIP409構(gòu)建重組質(zhì)粒pSIP409-plc,經(jīng)雙酶切鑒定和序列測定正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞并進行SppIP誘導(dǎo)表達。Western Blot證明重組蛋白表達成功,并且主要以包涵體形式存在,plc重組蛋白相對分子質(zhì)量分別為40 kDa。重組質(zhì)粒pSIP409-plc分別電轉(zhuǎn)化植物乳桿菌NC8細胞,PCR和雙酶切鑒定正確后進行SppIP誘導(dǎo)表達。Western Blot和間接免疫熒光鑒定表明,構(gòu)建的重組植物乳酸桿菌具有誘導(dǎo)分泌plc蛋白的能力,可作為黏膜免疫的候選抗原。
[Abstract]:According to the probiotic effect of lactic acid bacteria, the key pathogenic factor alpha toxin / phospholipase C of Clostridium perfringens was selected as antigen, and recombinant Lactobacillus plantarum was constructed by the PLC gene fragment of the alpha toxin producing peptide of Clostridium perfringens, and the recombinant plasmid pSIP409-plc was constructed by the shuttle carrier pSIP409 of plant lactobacillus, and was identified and sequenced by double enzyme cutting. After correct transformation of Escherichia coli BL21 (DE3) receptive cells and SppIP induced expression of.Western Blot, the recombinant protein was expressed successfully, and the expression of recombinant protein was mainly in the form of inclusion body, and the relative molecular mass of PLC recombinant protein was respectively 40 kDa. recombinant plasmid pSIP409-plc, respectively, the NC8 cells of Lactobacillus plantarum, PCR and double enzyme digestion were correctly identified. SppIP induced expression of.Western Blot and indirect immunofluorescence showed that the constructed recombinant lactobacilli had the ability to induce the secretion of PLC protein, which could be used as a candidate antigen for mucosal immunity.
【作者單位】： 黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院;黑龍江省訥河市動物防疫站;
【分類號】：S852.61

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