【摘要】：依據(jù)乳酸菌的腸道益生作用,選擇產(chǎn)氣莢膜梭菌關(guān)鍵致病因子α毒素/磷脂酶C為抗原,構(gòu)建產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素去除信號(hào)肽的plc基因片段重組植物乳桿菌,利用植物乳酸菌穿梭載體pSIP409構(gòu)建重組質(zhì)粒pSIP409-plc,經(jīng)雙酶切鑒定和序列測(cè)定正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞并進(jìn)行SppIP誘導(dǎo)表達(dá)。Western Blot證明重組蛋白表達(dá)成功,并且主要以包涵體形式存在,plc重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量分別為40 kDa。重組質(zhì)粒pSIP409-plc分別電轉(zhuǎn)化植物乳桿菌NC8細(xì)胞,PCR和雙酶切鑒定正確后進(jìn)行SppIP誘導(dǎo)表達(dá)。Western Blot和間接免疫熒光鑒定表明,構(gòu)建的重組植物乳酸桿菌具有誘導(dǎo)分泌plc蛋白的能力,可作為黏膜免疫的候選抗原。
[Abstract]:According to the probiotic effect of lactic acid bacteria, the key pathogenic factor alpha toxin / phospholipase C of Clostridium perfringens was selected as antigen, and recombinant Lactobacillus plantarum was constructed by the PLC gene fragment of the alpha toxin producing peptide of Clostridium perfringens, and the recombinant plasmid pSIP409-plc was constructed by the shuttle carrier pSIP409 of plant lactobacillus, and was identified and sequenced by double enzyme cutting. After correct transformation of Escherichia coli BL21 (DE3) receptive cells and SppIP induced expression of.Western Blot, the recombinant protein was expressed successfully, and the expression of recombinant protein was mainly in the form of inclusion body, and the relative molecular mass of PLC recombinant protein was respectively 40 kDa. recombinant plasmid pSIP409-plc, respectively, the NC8 cells of Lactobacillus plantarum, PCR and double enzyme digestion were correctly identified. SppIP induced expression of.Western Blot and indirect immunofluorescence showed that the constructed recombinant lactobacilli had the ability to induce the secretion of PLC protein, which could be used as a candidate antigen for mucosal immunity.
【作者單位】： 黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院;黑龍江省訥河市動(dòng)物防疫站;
【分類號(hào)】：S852.61

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔣玉文;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素研究進(jìn)展[J];中國(guó)獸藥雜志;2001年06期

2 孔慶娟;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2011年01期

3 李璐;趙寶華;;產(chǎn)氣莢膜梭菌主要致死性毒素的研究進(jìn)展[J];畜牧與飼料科學(xué);2011年04期

4 于立新;蘇佳;趙曉慧;馬學(xué)恩;么宏強(qiáng);;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的基因擴(kuò)增和提純鑒定[J];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年04期

5 趙宇亮;張聰敏;王琳;霍萍萍;趙寶華;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年12期

6 陳興祥,薛家賓,黃克和,王啟明,徐為中;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的提純?cè)囼?yàn)[J];畜牧與獸醫(yī);2002年03期

7 李永明,王開功,文明,周碧君;產(chǎn)氣莢膜梭菌α-毒素的提取與鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2002年02期

8 文其乙,劉秀梵;多重PCR方法快速檢測(cè)糞樣中產(chǎn)氣莢膜梭菌[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2002年01期

9 文明,王開功;幾種分離產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)基的比較[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2002年12期

10 梁源祥,李會(huì)創(chuàng),冼恩廣,李布勇;牛產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離與鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2004年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前9條

1 王海榮;呂長(zhǎng)輝;趙凱;柴同杰;陸承平;;山東省兔腹瀉病例產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離及基因定型[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

2 么宏強(qiáng);蘇佳;于立新;馬學(xué)恩;;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素的提純鑒定及其基因的克隆[A];2012年中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)病理學(xué)分會(huì)暨中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)動(dòng)物病理生理專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

3 田冬青;蔣玉文;陳小云;楊京嵐;丁家波;;產(chǎn)氣莢膜梭菌多重PCR定型方法的建立[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2006年

4 李娜;吳建勇;李建軍;楊學(xué)云;王登峰;段新華;王治才;;D型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的克隆與高效表達(dá)[A];生態(tài)環(huán)境與畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2012年學(xué)術(shù)年會(huì)和第七屆全國(guó)畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)會(huì)議論文集——T07家畜微生態(tài)與健康養(yǎng)殖專題[C];2012年

5 許崇利;歐陽紅生;許崇波;張艷平;;乳糖誘導(dǎo)劑對(duì)重組C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因表達(dá)的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

6 王光華;周繼章;藺國(guó)珍;鄭福英;曹小安;韓文祥;楊良存;宋竹青;邱昌慶;;產(chǎn)氣莢膜梭菌青海分離株α毒素基因克隆與核苷酸序列分析[A];第九屆中國(guó)生物毒素學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要[C];2009年

7 許崇波;陳向東;許崇利;逄越;高鳳山;;C型產(chǎn)氣莢膜梭菌α、β1、β2基因融合[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第三屆豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

8 樊金;柴同杰;;產(chǎn)氣莢膜梭菌主要外毒素的結(jié)構(gòu)與功能[A];第十一屆中國(guó)生物毒素研究及醫(yī)藥應(yīng)用年會(huì)論文摘要集[C];2013年

9 許崇利;許崇波;惠遠(yuǎn)峰;胡靜濤;;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因的定點(diǎn)突變與表達(dá)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第十二次人獸共患病學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第六屆第十四次教學(xué)專業(yè)委員會(huì)論文集[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 孟祥莉;宏分類組學(xué)分析青藏高原禿鷲腸道菌群及放線菌新種的發(fā)現(xiàn)[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2017年

2 林初文;產(chǎn)氣莢膜梭菌B型C58-1株α、β1和ε毒素的高效表達(dá)與免疫效力評(píng)價(jià)及生產(chǎn)工藝改進(jìn)[D];吉林大學(xué);2015年

3 宋佰芬;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素基因在干酪乳桿菌基因組中的表達(dá)及免疫效果評(píng)價(jià)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬壯;廣州市冷鮮雞產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染分析及netB菌株的致病性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 鮑長(zhǎng)磊;產(chǎn)氣莢膜梭菌不同毒素型多重PCR和α毒素抗體ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

3 孫劉妹;產(chǎn)氣莢膜梭菌四聯(lián)外毒素基因α-β2-ε-β1在重組干酪乳酸桿菌表達(dá)及遺傳穩(wěn)定性分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 王瑩瑩;A型產(chǎn)氣莢膜梭菌主要抗原蛋白篩選及其免疫保護(hù)作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 康文娟;雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌多重PCR鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

6 秦貴平;產(chǎn)氣莢膜梭菌α毒素免疫組化檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 雷宇;產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離鑒定及PCR檢測(cè)方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

8 曾慶豐;新型沙門菌載體遞送A型產(chǎn)氣莢膜梭菌PlcC、NetB及Fba抗原的初步研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

9 劉家森;兔產(chǎn)氣莢膜梭菌（A型）α毒素原核表達(dá)產(chǎn)物免疫原性分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 王超;產(chǎn)氣莢膜梭菌ε毒素突變基因重組乳酸桿菌的構(gòu)建及其免疫學(xué)評(píng)價(jià)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：2152353