【摘要】：目的三聯(lián)組氨酸核苷酸結(jié)合蛋白2(Hint2,histidine triad nucleotide binding protein 2)在肝癌組織中低表達(dá)并與臨床病理分期和病人預(yù)后密切相關(guān),為研究Hint2的基因表達(dá)調(diào)控,構(gòu)建人Hint2啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒并鑒定活性。方法提取人基因組DNA,以其為模板,將含有Hint2啟動(dòng)子的不同長(zhǎng)度的片段插入熒光素酶質(zhì)粒p GL3-basic,后與β-半乳糖苷酶共轉(zhuǎn)染He La細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后24h通過(guò)β-半乳糖苷酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,通過(guò)熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果質(zhì)粒p GL3-h1(-6--463,457bp),p GL3-h2(-6--1255,1249bp)構(gòu)建成功后,與β-半乳糖苷酶共轉(zhuǎn)染人子宮頸癌He La細(xì)胞。轉(zhuǎn)錄活性=熒光素酶值/β-半乳糖苷酶值,結(jié)果顯示p GL3-basic熒光素酶值/β-半乳糖苷酶值為147.3272,而p GL3-h1為67936,p GL3-h2為64234.19�？召|(zhì)粒與p GL3-h1,p GL3-h2之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而p GL3-h1,p GL3-h2之間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 Hint2位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游-6至--463之間的啟動(dòng)子區(qū)域具有強(qiáng)轉(zhuǎn)錄活性。
[Abstract]:Objective to study the regulation of Hint2 gene expression in hepatocellular carcinoma (HCC) by low expression of Hint2 histidine triad nucleotide binding protein 2 (Hint2H histidine triad nucleotide binding protein 2), which is closely related to clinicopathological stage and prognosis. Construction of human Hint2 promoter luciferase reporter gene plasmid and identification of activity. Methods Human genomic DNA was extracted and inserted into luciferase plasmid pGL3-basic. then co-transfected with 尾 -galactosidase into He-La cells. The transfection efficiency was detected by 尾 -galactosidase assay 24 hours after transfection. Transcriptional activity was detected by luciferase assay. Results the plasmid p GL3-h1 (-6-463457bp) was successfully constructed and co-transfected with 尾 -galactosidase into human cervical cancer He-La cells. Transcriptional activity = luciferase / 尾 -galactosidase. The results showed that the value of p GL3-basic luciferase / 尾 -galactosidase was 147.3272 and p GL3-h1 was 67936 p GL3-h2 64234.19. There was significant difference between empty plasmids and p GL3-h1P GL3-h2, but there was no significant difference between p GL3-h1P GL3-h2. Conclusion Hint2 has strong transcriptional activity in the promoter region between 6-463 upstream of the transcription initiation site.
【作者單位】： 福建省立醫(yī)院藥學(xué)部;福建省立醫(yī)院腫瘤外科;
【基金】：福建衛(wèi)生廳中青年骨干項(xiàng)目(No.2013-ZQN-JC-6) 福建科技廳面上項(xiàng)目(General program No.2015J01422) 福建省衛(wèi)生廳青年項(xiàng)目(No.2014-1-4)
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7

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