【摘要】：為探索應(yīng)用基因敲除技術(shù)研究三角褐指藻基因功能的研究體系,本文以三角褐指藻甘油激酶基因作為靶基因,構(gòu)建了同源重組基因敲除載體,利用微彈轟擊法將該載體成功轉(zhuǎn)化至三角褐指藻中,經(jīng)100μg/mL Zeocin篩選和PCR驗(yàn)證獲得了34個(gè)陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因藻株;并進(jìn)一步對(duì)三角褐指藻甘油激酶基因敲除轉(zhuǎn)基因藻株的甘油激酶表達(dá)量和生長(zhǎng)兩方面進(jìn)行分析,結(jié)果顯示胞外甘油兼養(yǎng)不影響轉(zhuǎn)基因藻細(xì)胞生長(zhǎng),甘油激酶不表達(dá)或表達(dá)量降低.本文通過(guò)構(gòu)建敲除載體,完成了遺傳轉(zhuǎn)化,篩選獲得陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因藻,并進(jìn)一步研究了轉(zhuǎn)基因藻的性狀,最終建立了應(yīng)用同源重組基因敲除技術(shù)靶向研究三角褐指藻基因功能的研究體系.
[Abstract]:In order to study the gene function of Phaeopsis triangularis by using gene knockout technique, a homologous recombinant gene knockout vector was constructed using glycerine kinase gene as target gene. The vector was successfully transformed into Phaeodactylum triangularis by microelastic bombardment, and 34 positive transgenic alga strains were obtained by Zeocin screening and PCR verification with 100 渭 g / mL Zeocin. Furthermore, the expression and growth of glycerine kinase in the transgenic alga strain were analyzed. The results showed that extracellular glycerol combined with culture did not affect the growth of transgenic alga cells. Glycerol kinase was not expressed or decreased. By constructing knockout vector, genetic transformation was completed, positive transgenic algae were screened, and the characters of transgenic algae were further studied. Finally, a research system of homologous recombinant gene knockout technique was established to study the gene function of Phaeopsis triangularis.
【作者單位】： 四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(40976092) 四川省科技廳項(xiàng)目(2014JY0171) 四川省電科院項(xiàng)目(13H1138)
【分類號(hào)】：Q943.2

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本文編號(hào)：2131540