【摘要】：昆蟲的絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpin)可以通過抑制絲氨酸蛋白酶的活性調(diào)控機體的免疫防御反應(yīng)。依據(jù)柞蠶中腸轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中一段編碼serpin的CDS序列設(shè)計正、反向引物,以柞蠶幼蟲總c DNA為模板克隆得到一段全長1 239 bp的序列,經(jīng)序列分析后命名為Apserpin-6(Gen Bank登錄號:MF944108)。該基因編碼412個氨基酸殘基,其中N端第1~17位氨基酸為信號肽序列,在C端第357~391位氨基酸之間有一個反應(yīng)中心環(huán),第374~375位絲氨酸之間是預(yù)測的蛋白質(zhì)裂解位點。半定量RT-PCR檢測Apserpin-6在柞蠶5齡幼蟲脂肪體中的表達(dá)量最高,在血淋巴和頭部組織的表達(dá)量次之,在中腸、絲腺和馬氏管中的表達(dá)量較低。熒光定量PCR檢測在受到柞蠶腸球菌(Enterococcus pernyi)、白僵菌(Beauveria bassiana)以及柞蠶核型多角體病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus)侵染后的柞蠶幼蟲血淋巴中,Apserpin-6的表達(dá)量均明顯上升。利用在原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的重組Apserpin-6蛋白,對柞蠶幼蟲血淋巴中的酚氧化酶原(pro PO)和酚氧化酶(PO)活性進(jìn)行體外抑制試驗,結(jié)果顯示該重組蛋白能夠抑制pro PO的活性,但對PO活性沒有影響。試驗結(jié)果提示,Apserpin-6可能作為一種負(fù)調(diào)控因子參與調(diào)控柞蠶血淋巴對于病原菌的免疫防御反應(yīng)。
[Abstract]:Insect serine protease inhibitor (serpin) can regulate the immune defense response by inhibiting the activity of serine protease. According to a sequence of serpin coding in Antheraea pernyi (Antheraea pernyi) midgut transcriptional database, a sequence of 1,239bp was cloned from total cDNA of tussah larvae by reverse primers. The sequence was named as Apserpin-6 (GenBank accession number: MF944108). The gene encodes 412 amino acid residues, in which N terminal 1 amino acid is a signal peptide sequence, there is a central ring between C terminal 357 and 391 amino acids, and between 374 and 375 serine is the predicted protein cleavage site. Semi-quantitative RT-PCR was used to detect the expression of Apserpin-6 in the fat body of 5th instar larvae of Antheraea pernyi, followed by hemolymph and head tissue, and lower in midgut, silk gland and Markov tube. The expression of Apserpin-6 in the haemolymph of Antheraea pernyi larvae infected by Enterococcus pernyi), Beauveria bassiana and Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus (Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus) was detected by fluorescence quantitative PCR. Using recombinant Apserpin-6 protein expressed in prokaryotic expression system, the activity of phenol oxidase (pro) and phenol oxidase (PO) in hemolymph of Antheraea pernyi larvae was tested in vitro. The results showed that the recombinant protein could inhibit the activity of pro PO. But there was no effect on PO activity. The results suggest that Apserpin-6 may be a negative regulatory factor in regulating the immune defense response of tussah hemolymph to pathogenic bacteria.
【作者單位】： 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)柞蠶研究所 遼寧省昆蟲資源工程技術(shù)研究中心;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(No.CARS-18) 遼寧省教育廳科學(xué)研究項目(No.LSNYB201613)
【分類號】：S885.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 翟紅本;河南省柞蠶品種現(xiàn)狀及其發(fā)展對策[J];北方蠶業(yè);2000年04期

2 王德生;遼寧省育出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)柞蠶品種[J];農(nóng)村百事通;2002年17期

3 于長友,崔冰,朱景田;淺析柞蠶品種退化的原因和防止措施[J];特種經(jīng)濟動植物;2005年08期

4 朱緒偉;;引進(jìn)四川一化性柞蠶品種的調(diào)查與分析[J];北方蠶業(yè);2006年02期

5 冀萬杰;王鳳成;仝振祥;張博;;對加強柞蠶品種資源開發(fā)利用的幾點認(rèn)識[J];北方蠶業(yè);2009年01期

6 王慶忠;馮世華;;柞蠶品種128、130與101的經(jīng)濟性狀比較[J];農(nóng)技服務(wù);2009年04期

7 王慶忠;羅朝斌;;貴州13個柞蠶品種主要經(jīng)濟性狀調(diào)查[J];廣東農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年06期

8 仝振祥;王鳳成;冀萬杰;張博;;主成分分析法在柞蠶品種資源經(jīng)濟性狀評價中的應(yīng)用[J];蠶業(yè)科學(xué);2010年03期

9 王慶忠;涂祥敏;羅朝斌;岳宣;;柞蠶品種河33在貴州的放養(yǎng)效果[J];農(nóng)技服務(wù);2011年01期

10 冀萬杰;王鳳成;仝振祥;張博;;淺談遼寧柞蠶品種資源開發(fā)利用的突出貢獻(xiàn)[J];北方蠶業(yè);2011年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 仝振祥;王鳳成;冀萬杰;張博;;主成分分析在柞蠶種質(zhì)資源評價中的應(yīng)用[A];中國蠶學(xué)會第六屆家蠶和柞蠶遺傳育種學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

2 王鳳成;宿桂梅;赫英姿;仝振祥;;柞蠶不同品種對柞蠶鏈球菌抗性與經(jīng)濟性狀相關(guān)性的初步研究[A];全面建設(shè)小康社會：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會論文集（上）[C];2003年

3 姜義仁;石生林;楊瑞生;夏潤璽;車春娜;秦利;;柞蠶新品種“沈黃2號”選育研究[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

4 靳向東;朱興友;郝大東;任曉義;萬軍;趙先進(jìn);;柞蠶新品種“選大4號”選育初報[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

5 徐亮;孟憲民;戚利;劉鳳云;宿桂梅;焦陽;;柞蠶雜交種數(shù)量性狀的主成分分析[A];中國蠶學(xué)會第六屆青年學(xué)術(shù)研討會論文集（3）[C];2009年

6 郝大東;朱興友;靳向東;任曉義;萬軍;;柞蠶新品種“永青”選育初告[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

7 趙云吉;;提高柞蠶多元雜交質(zhì)量 促進(jìn)柞蠶生產(chǎn)的高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)[A];中國蠶學(xué)會第七次全國代表大會論文集[C];2003年

8 仝振祥;王鳳成;;柞蠶不同品種蛹期酯酶同工酶的初步研究[A];全面建設(shè)小康社會：中國科技工作者的歷史責(zé)任——中國科協(xié)2003年學(xué)術(shù)年會論文集（上）[C];2003年

9 朱興友;郝大東;靳向東;任曉義;萬軍;趙先進(jìn);;柞蠶新品種“吉青”選育初報[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

10 周新鋒;劉勤;洪恩眾;霍錫敏;張勁松;程秋菊;楊瑞生;;高寒地區(qū)柞蠶四元雜交新品種呼雜一號的選育[A];中國蠶學(xué)會第六屆青年學(xué)術(shù)研討會論文集（3）[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 包臣;柞蠶品種選擇及效益分析[N];吉林農(nóng)村報;2009年

2 王德生;遼寧育出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)柞蠶品種[N];農(nóng)民日報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 張從芬;柞蠶小熱休克蛋白的免疫學(xué)功能及其作用機制研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 劉丹梅;柞蠶新型轉(zhuǎn)基因載體構(gòu)建和精子介導(dǎo)轉(zhuǎn)化研究[D];大連理工大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 李慧君;柞蠶PTTH基因的克隆及表達(dá)分析[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 張小娟;柞蠶防御基因defense的克隆、表達(dá)與功能分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 李靜靜;柞蠶脂肪酶相關(guān)蛋白（ApLSP）的表達(dá)模式和活性分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 姚立虎;柞蠶銅鋅超氧化物歧化酶基因的克隆與表達(dá)分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

5 王磊;柞蠶及家蠶卵黃原蛋白基因的克隆與序列分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 陳默;柞蠶線粒體控制區(qū)的結(jié)構(gòu)特征與FK506結(jié)合蛋白基因的表達(dá)譜分析[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 李鋒;絹絲昆蟲柞蠶卵黃原基因（Vg）5’端的克隆及序列分析[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

8 諶苗苗;野蠶基因組研究Ⅰ[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

，

本文編號：2126607