【摘要】：昆蟲的絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpin)可以通過抑制絲氨酸蛋白酶的活性調(diào)控機(jī)體的免疫防御反應(yīng)。依據(jù)柞蠶中腸轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫中一段編碼serpin的CDS序列設(shè)計(jì)正、反向引物,以柞蠶幼蟲總c DNA為模板克隆得到一段全長1 239 bp的序列,經(jīng)序列分析后命名為Apserpin-6(Gen Bank登錄號(hào):MF944108)。該基因編碼412個(gè)氨基酸殘基,其中N端第1~17位氨基酸為信號(hào)肽序列,在C端第357~391位氨基酸之間有一個(gè)反應(yīng)中心環(huán),第374~375位絲氨酸之間是預(yù)測的蛋白質(zhì)裂解位點(diǎn)。半定量RT-PCR檢測Apserpin-6在柞蠶5齡幼蟲脂肪體中的表達(dá)量最高,在血淋巴和頭部組織的表達(dá)量次之,在中腸、絲腺和馬氏管中的表達(dá)量較低。熒光定量PCR檢測在受到柞蠶腸球菌(Enterococcus pernyi)、白僵菌(Beauveria bassiana)以及柞蠶核型多角體病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus)侵染后的柞蠶幼蟲血淋巴中,Apserpin-6的表達(dá)量均明顯上升。利用在原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的重組Apserpin-6蛋白,對柞蠶幼蟲血淋巴中的酚氧化酶原(pro PO)和酚氧化酶(PO)活性進(jìn)行體外抑制試驗(yàn),結(jié)果顯示該重組蛋白能夠抑制pro PO的活性,但對PO活性沒有影響。試驗(yàn)結(jié)果提示,Apserpin-6可能作為一種負(fù)調(diào)控因子參與調(diào)控柞蠶血淋巴對于病原菌的免疫防御反應(yīng)。
[Abstract]:Insect serine protease inhibitor (serpin) can regulate the immune defense response by inhibiting the activity of serine protease. According to a sequence of serpin coding in Antheraea pernyi (Antheraea pernyi) midgut transcriptional database, a sequence of 1,239bp was cloned from total cDNA of tussah larvae by reverse primers. The sequence was named as Apserpin-6 (GenBank accession number: MF944108). The gene encodes 412 amino acid residues, in which N terminal 1 amino acid is a signal peptide sequence, there is a central ring between C terminal 357 and 391 amino acids, and between 374 and 375 serine is the predicted protein cleavage site. Semi-quantitative RT-PCR was used to detect the expression of Apserpin-6 in the fat body of 5th instar larvae of Antheraea pernyi, followed by hemolymph and head tissue, and lower in midgut, silk gland and Markov tube. The expression of Apserpin-6 in the haemolymph of Antheraea pernyi larvae infected by Enterococcus pernyi), Beauveria bassiana and Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus (Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus) was detected by fluorescence quantitative PCR. Using recombinant Apserpin-6 protein expressed in prokaryotic expression system, the activity of phenol oxidase (pro) and phenol oxidase (PO) in hemolymph of Antheraea pernyi larvae was tested in vitro. The results showed that the recombinant protein could inhibit the activity of pro PO. But there was no effect on PO activity. The results suggest that Apserpin-6 may be a negative regulatory factor in regulating the immune defense response of tussah hemolymph to pathogenic bacteria.
【作者單位】： 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)柞蠶研究所 遼寧省昆蟲資源工程技術(shù)研究中心;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(No.CARS-18) 遼寧省教育廳科學(xué)研究項(xiàng)目(No.LSNYB201613)
【分類號(hào)】：S885.1

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本文編號(hào)：2126607