【摘要】：目的:探討CARMA3基因在人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116生長和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制。方法:選取高表達(dá)CARMA3的人結(jié)腸癌細(xì)胞株。應(yīng)用慢病毒技術(shù)敲減CARMA3基因,puromycin篩選后構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HCT116-sh CARMA3細(xì)胞株。Real-time PCR和Western blot鑒定mRNA和蛋白表達(dá)的抑制情況。WST-1法和RTCA S16系統(tǒng)分析細(xì)胞增殖情況。集落形成實驗觀察集落形成。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期。顯微鏡下觀察上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)形態(tài)變化。劃痕實驗和Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移與侵襲能力的改變。Western blot分析相關(guān)分子變化,探討可能機(jī)制。結(jié)果:4株人結(jié)腸癌細(xì)胞株中HCT116細(xì)胞的CARMA3 mRNA和蛋白表達(dá)量最高,構(gòu)建穩(wěn)定沉默CARMA3的HCT116-sh CARMA3細(xì)胞株,其中HCT116-sh CARMA3-93細(xì)胞中CARMA3的mRNA和蛋白受抑制最明顯,將其作為細(xì)胞模型。相比于對照組,HCT116-sh CARMA3-93細(xì)胞形態(tài)發(fā)生EMT逆轉(zhuǎn),其增殖、集落形成、遷移和侵襲能力明顯下降(P0.01)。HCT116-sh CARMA3-93的G_0/G_1細(xì)胞所占比例明顯升高,S期細(xì)胞比例相應(yīng)下降(P0.05)。信號通路分子Bcl10和NF-κB表達(dá)明顯下調(diào),MALT-1變化不明顯;細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclin D1顯著下調(diào),cyclin A表達(dá)略有下降;侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)分子MMP-2和MMP-9的表達(dá)下調(diào),MMP-7未見改變,TIMP-1和TIMP-2的表達(dá)上調(diào);EMT相關(guān)分子E-cadherin的表達(dá)水平升高,N-cadherin、Snail、Slug和Twist的表達(dá)水平呈不同程度降低。結(jié)論:CARMA3可通過改變細(xì)胞周期和侵襲轉(zhuǎn)移分子的表達(dá)、調(diào)控EMT來影響結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的生長和侵襲轉(zhuǎn)移。這可能與NF-κB信號通路發(fā)生改變有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to investigate the role and mechanism of CARMA3 gene in the growth, invasion and metastasis of human colon cancer cell line HCT116. Methods: human colon cancer cell lines with high expression of CARMA3 were selected. The stable transfected HCT116-sh CARMA3 cell line. Real-time PCR and Western blot were used to identify the inhibition of mRNA and protein expression. WST-1 method and RTCA S16 system were used to analyze the proliferation of HCT116-sh CARMA3 cell line. Colony formation experiment observation of colony formation. Cell cycle was detected by flow cytometry. The morphological changes of epithelial-mesenchymal transformation (EMT) were observed under microscope. The changes of cell migration and invasion ability were detected by scratch test and Transwell assay. Western blot was used to analyze the molecular changes and explore the possible mechanism. Results the expression of CARMA3 mRNA and protein in HCT116 cells was the highest in human colon cancer cell lines. HCT116-sh CARMA3 cells were stably silenced. HCT116-sh CARMA3-93 cells had the most obvious inhibition of CARMA3 mRNA and protein. Compared with the control group, the morphological EMT reversal of HCT116-sh CARMA3-93 cells, the proliferation, colony formation, migration and invasion ability of HCT116-sh CARMA3-93 cells decreased significantly (P0.01). HCT116-sh CARMA3-93 GSP / G-1 cells accounted for a significant increase in the proportion of S phase cells (P0.05). The signal pathway molecules Bcl10 and NF- 魏 B down-regulated the expression of pMALT-1, while the expression of cyclin A decreased slightly by cell cycle related protein cyclin D1. The down-regulated expression of MMP-2 and MMP-9 did not change the expression of TIMP-1 and TIMP-2. The expression level of E-cadherin, an EMT related molecule, was increased and the expression levels of Slug and Twist were decreased in different degrees. Conclusion the growth, invasion and metastasis of human colon cancer cell line HCT116 can be affected by the regulation of EMT by changing the cell cycle and the expression of invasion and metastasis molecules in human colon cancer cell line HCT116. This may be related to the change of NF- 魏 B signaling pathway.
【作者單位】： 福建省腫瘤醫(yī)院福建醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤免疫學(xué)研究室;福建省腫瘤醫(yī)院福建醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院福建省腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點實驗室;
【基金】：國家臨床重點�？平ㄔO(shè)項目資助 福建省衛(wèi)生廳青年科研課題(No.2014-1-12)
【分類號】：R735.35

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本文編號：2123613