【摘要】：第一部分:LSP1基因多態(tài)性rs907611與膀胱癌的相關(guān)性分析目的:研究白細(xì)胞特異性蛋白1(Leukocyte-specific protein 1,LSP1)單核苷酸多態(tài)性rs907611與天津地區(qū)漢族人群膀胱尿路上皮癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。方法:收集2012年5月至2014年6月在天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院初次確診的535例膀胱尿路上皮癌患者的血液及649例對照組人群(與病例組年齡、性別相匹配的正常體檢人群)的血液進(jìn)行研究,提取全血基因組DNA,應(yīng)用PCR-LDR方法進(jìn)行基因分型。首先檢驗(yàn)分型結(jié)果是否遵循HWE平衡定律,然后采用多因素非條件logistic回歸檢驗(yàn)來分析rs907611基因型與天津漢族人群膀胱癌易感性、分期、分級、吸煙及進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性;應(yīng)用Kaplan-Meier曲線和COX回歸模型來分析rs907611基因型與膀胱癌短期復(fù)發(fā)的相關(guān)性。結(jié)果:分型結(jié)果符合HWE平衡定律(p0.05)。LSP1 rs907611存在三種基因型:野生型(G/G)、突變雜合子(G/A)及突變純合子(A/A)。以野生型(G/G)基因型為對照,突變純合子(A/A)人群膀胱癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯提高(p=0.036,OR=1.786,95%CI 1.038-3.072),突變型(G/A+A/A)人群中膀胱癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也有輕微升高(p=0.049,OR=1.264,95%CI 1.001-1.596);與G等位基因相比,A等位基因與膀胱癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)存在明顯的相關(guān)性(p=0.019,OR=1.264,95%CI1.038-1.538)。分層分析結(jié)果顯示rs907611與膀胱癌分期分級的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)沒有明顯的相關(guān)性。另外,結(jié)果顯示rs907611對吸煙人群膀胱癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)沒有影響。結(jié)合隨訪數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,沒有發(fā)現(xiàn)這rs907611與非肌層浸潤性膀胱癌的短期復(fù)發(fā)存在相關(guān)性。結(jié)論:LSP1基因rs907611位點(diǎn)基因突變可顯著增加天津地區(qū)漢族人群膀胱癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),尤其與低級別、非肌層浸潤性膀胱癌的發(fā)生關(guān)系密切。這一基因并不會(huì)影響吸煙患者膀胱癌的發(fā)病率,也與天津地區(qū)漢族人群膀胱癌的短期復(fù)發(fā)沒有顯著地相關(guān)性。第二部分:膀胱癌易感位點(diǎn)LSP1 rs907611的功能分析目的:通過研究rs907611多態(tài)性位點(diǎn)周圍基因的表達(dá)量與rs907611基因型的相關(guān)性來篩選單核苷酸多態(tài)性rs907611的靶基因,從而進(jìn)一步探討rs907611增加膀胱癌易感性的作用機(jī)制。方法:在UCSC Genome Browser中檢索rs907611位點(diǎn)兩側(cè)各250kbp范圍內(nèi)的基因(包括DNA、microRNA和lincRNA)。從我實(shí)驗(yàn)室膀胱癌標(biāo)本庫中隨機(jī)選擇與rs907611的三種基因型相對應(yīng)的患者的膀胱癌及癌旁組織標(biāo)本共24對,其中G/G基因型10對、G/A及A/A基因型各7對,提取組織RNA,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量Q-PCR的方法檢測相應(yīng)基因的表達(dá)情況。結(jié)果:在rs907611兩側(cè)500kbp范圍內(nèi)共存在21個(gè)基因,其中DNA包括KRTAP5-3、KRTAP5-4、KRTAP5-5、KRTAP5-6、IFITM10、SYT8、TNNI2、LSP1、CTSD、TNNT3、HOTS和MRPL23;microRNA包括MIR4298、MIR7847和MIR675;lincRNA包括MRPL23-AS1、FAM99A、FAM99B、H19、Linc01219及Linc01150。Q-PCR結(jié)果顯示以上所有基因的表達(dá)量與rs907611的基因型均沒有明顯的相關(guān)性(p0.05);但是我們發(fā)現(xiàn)癌組織中LSP1及MIR7847的表達(dá)量明顯低于癌旁組織(p0.05),癌組織中H19和MIR675的表達(dá)量明顯高于癌旁組織(p0.05)。結(jié)論:在LSP1基因多態(tài)性rs907611位點(diǎn)周圍500kbp范圍內(nèi)沒有rs907611的靶基因;LSP1及MIR7847在癌組織中明顯低表達(dá),而H19和MIR675在膀胱癌組織中明顯高表達(dá)。第三部分:LSP1在膀胱癌中的表達(dá)及意義目的:研究LSP1在膀胱癌中的表達(dá)水平,并初步探討LSP1對膀胱癌細(xì)胞的影響。方法:應(yīng)用免疫組化和western-blot技術(shù)檢測膀胱癌組織及癌旁正常膀胱黏膜LSP1的表達(dá)情況。構(gòu)建LSP1過表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染T24膀胱癌細(xì)胞,應(yīng)用Q-PCR、Western-blot檢測轉(zhuǎn)染效果,應(yīng)用MTT、流式細(xì)胞術(shù)、劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測LSP1對膀胱癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響。結(jié)果:免疫組化和Western-blot結(jié)果顯示LSP1在膀胱癌組織中明顯低表達(dá)。我們成功構(gòu)建pcDNA3.1(+)/LSP1過表達(dá)質(zhì)粒并順利轉(zhuǎn)染T24膀胱癌細(xì)胞;MTT結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染LSP1過表達(dá)質(zhì)粒后T24細(xì)胞的增殖受到明顯的抑制;流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示出T24細(xì)胞中LSP1過表達(dá)后細(xì)胞凋亡明顯增加;劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LSP1過表達(dá)后,T24細(xì)胞的遷移和侵襲能力明顯減弱。結(jié)論:LSP1是一種抑癌基因,它在膀胱癌組織中明顯低表達(dá),可以明顯抑制膀胱細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,同時(shí)促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:The relationship between rs907611 genotype and the risk of bladder cancer in Han population in Tianjin was studied by using Kaplan - Meier curves and COX regression models . Conclusion : The mutation of rs907611 locus can significantly increase the risk of bladder cancer in the Han population in Tianjin . The expression of LSP1 in bladder cancer was detected by immunohistochemistry and Western - blot . The results showed that the expression of LSP1 in bladder cancer was significantly lower than that in adjacent tissues ( p < 0.05 ) . Conclusion : LSP1 is a kind of tumor suppressor gene , which can significantly inhibit the proliferation , migration and invasion of bladder cells and promote the apoptosis of bladder cancer cells .
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14

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本文編號：2123013