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陸地棉開花相關基因的功能研究及調控分析

發(fā)布時間:2021-03-16 10:59
  棉花是我國最重要的經濟作物,其中陸地棉是四大棉花栽培種中重要的品種同時也是種植最為廣泛的棉花栽培種。我國人多地少,糧棉爭地矛盾日益突出,早熟性作為棉花的重要性狀之一,成為陸地棉最重要的育種目標。研究表明,開花早晚與棉花的早熟性密切相關。FT、SOC1和SPL等基因位于開花調控途徑的重要位置,接受上游開花基因的信號誘導,并促進下游花器官基因的表達。作為重要的開花調控基因,FT被譽為“開花素”,SOC1和SPL等作為開花整合因子,在整個開花調控通路中起著非常重要的作用。本研究圍繞這些開花相關基因展開研究,一是研究陸地棉中開花相關基因的表達及功能,二是研究這些基因之間的相互作用即調控關系,主要結論如下:1.通過blast比對從最初被測序的雷蒙德氏棉中分析并克隆到9個PEBP家族基因,并分別分析了該家族基因在亞洲棉和陸地棉中的基本信息,所有PEBP基因都有磷脂酰乙醇胺結合蛋白保守結構域。通過進化樹分析發(fā)現(xiàn)該家族基因可分為FT亞組、TFL亞組、MFT亞組和PEBP亞組。熒光定量實驗結果表明GhFT、GhPEBPs和GhTFL1s等基因的功能主要可能集中于營養(yǎng)生長階段葉片的發(fā)育和信號的運輸傳導,而MFT同源基因的功能可能是根部的發(fā)育和種子的萌發(fā)。PEBP家族基因在不同陸地棉材料、不同光周期處理和不同生育期的棉花品種中表達存在特異性,表明同一家族中的基因對開花的影響存在差異。2.從陸地棉中克隆到24個SPL家族基因,序列分析比對分析結果表明,棉屬中GhSPLs和其他物種中SPLs基因具有高度保守性。進化樹分析、內含子外顯子分析和模體分析表明,GhSPLs能分為八個亞組,同一亞組中的基因結構基本相似,而不同亞組中的基因在結構上存在差異。功能預測表明18個GhSPLs基因是GhmiR156的靶基因,擬南芥中過表達GhSPL3和GhSPL18表明這兩個基因可能對葉片、側枝和花發(fā)育有重要作用。3.克隆兩個不同亞家族的MADS-box基因分別為GhSOC1和GhMADS42,分屬于SOC1-like和AP1-like亞家族。在不同生育期材料不同發(fā)育時期的分析表明:GhSOC1和GhMADS42基因在早熟材料中的表達量高于晚熟材料中的表達量,GhSOC1的優(yōu)勢表達早于GhMADS42,表明兩者之間存在著目中調控關系;轉基因結果表明,GhSOC1基因可以使擬南芥提前開花,蓮座葉數(shù)目減少,莖生葉數(shù)目增多;SOC1過表達轉化棉花能使棉花的花器官發(fā)生變異;過表達轉化MADS42的擬南芥植物不僅出現(xiàn)開花時間提前,同時頂端花序和側枝花序都發(fā)生變異。4.染色質免疫共沉淀實驗表明:GhSOC1能結合GhMADS41/42和GhSPL3基因的啟動子序列,直接調控該基因的表達。不能結合GhFT和GhSPL18基因的啟動子,有可能通過其他基因間接調控這兩個基因的表達。5.克隆AP1/FUL和SVP亞組以及FD在陸地棉中的同源基因,采用酵母雙雜交和雙分子熒光互補進行實驗,結果表明GhSOC1能與AP1/FUL亞組中的GhMADS41、GhMADS42、GhMADS43和GhMADS44相互作用;而GhFD只與GhFT互作。
【學位授予單位】:西北農林科技大學
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:S562
文章目錄
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 植物開花調控機制
        1.1.1 光周期途徑對開花的調控
        1.1.2 春化途徑對開花的調控
        1.1.3 赤霉素途徑對開花的調控
        1.1.4 自主途徑對開花的調控
        1.1.5 其他因素對開花的調控
    1.2 開花調控相關基因研究進展
        1.2.1 PEBP家族基因
        1.2.2 MADS-box家族基因
        1.2.3 microRNA與SPL家族基因
    1.3 棉花花發(fā)育研究進展
    1.4 研究的目的和意義
第二章 陸地棉PEBP基因家族的分析
    2.1 試驗材料
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 實驗處理及取樣
    2.2 試驗方法
        2.2.1 陸地棉PEBP家族基因的鑒定與克隆
        2.2.2 氨基酸序列分析和進化樹分析
        2.2.3 表達分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 棉花PEBP家族基因的鑒定及克隆
        2.3.2 結構分析
        2.3.3 進化樹分析結果
        2.3.4 表達分析結果
    2.4 討論
第三章 兩個PEBP基因的功能分析
    3.1 試驗材料
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 實驗處理及取樣
    3.2 試驗方法
        3.2.1 總RNA提取
        3.2.2 cDNA第一鏈合成
        3.2.3 qRT-PCR
        3.2.4 基因克隆及分析
        3.2.5 載體構建
        3.2.6 擬南芥轉化
        3.2.7 GUS染色
    3.3 結果與分析
        3.3.1 不同生育期品種中開花基因的表達模式
        3.3.2 GhFT和GhPEBP2基因功能分析
        3.3.3 GhFT和GhPEBP2基因啟動子分析
    3.4 討論
第四章 陸地棉GhSPL家族基因的克隆及功能分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 實驗處理及取樣
    4.2 試驗方法
        4.2.1 GhSPL家族基因的鑒定與克隆
        4.2.2 染色體定位
        4.2.3 系統(tǒng)進化樹分析
        4.2.4 保守模體的預測
        4.2.5 陸地棉SPL家族基因表達分析
    4.3 結果與分析
        4.3.1 GhSPL家族基因的鑒定及克隆
        4.3.2 染色體定位
        4.3.3 結構和模體分析
        4.3.4 不同物種SPL基因的系統(tǒng)進化樹分析
        4.3.5 表達模式分析
        4.3.6 GhSPL3和GhSPL18基因功能分析
    4.4 討論
第五章 陸地棉GhSOC1和GhMADS42基因的克隆及功能分析
    5.1 試驗材料
        5.1.1 材料
        5.1.2 實驗處理及取樣
    5.2 試驗方法
        5.2.1 總RNA提取
        5.2.2 cDNA第一鏈合成
        5.2.3 qRT-PCR
        5.2.4 基因克隆及分析
        5.2.5 載體構建
        5.2.6 擬南芥轉化
        5.2.7 棉花轉化
    5.3 結果與分析
        5.3.1 GhSOC1和GhMADS42基因的克隆及分析
        5.3.2 表達模式分析
        5.3.3 功能分析
    5.4 討論
第六章 GhSOC1蛋白與相關轉錄因子之間的調控
    6.1 試驗材料
    6.2 試驗方法
        6.2.1 啟動子序列分析
        6.2.2 染色質免疫共沉淀
        6.2.3 q PCR分析
    6.3 結果與分析
        6.3.1 GhSOC1蛋白與GhFT和GhMADS基因之間的關系
        6.3.2 GhSOC1蛋白與GhSPL基因之間的關系
    6.4 討論
第七章 開花相關基因的蛋白互作分析
    7.1 試驗材料
        7.1.1 植物材料
        7.1.2 質粒載體和菌株
    7.2 試驗方法
        7.2.1 酵母雙雜交檢測蛋白質之間的相互作用
        7.2.2 雙分子熒光互補驗證蛋白互作
    7.3 結果與分析
        7.3.1 GhSOC1與GhMADS蛋白的體外互作
        7.3.2 GhSOC1與GhMADS蛋白的體內互作
        7.3.3 GhFD與棉花中FT和PEBP2蛋白的體外互作
        7.3.4 GhFD與棉花中FT和PEBP2蛋白的體內互作
    7.4 討論
第八章 結論與展望
    8.1 結論與創(chuàng)新點
    8.2 討論與展望
參考文獻
致謝
作者簡介
 

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