本文選題：微RNA + UHRF　； 參考：《西南大學學報(自然科學版)》2017年07期

【摘要】：目的:探討人腎上皮細胞293T中l(wèi)et-7a對靶基因UHRF1的負性調(diào)控作用.方法:運用生物信息學技術對let-7a靶基因進行預測和分析.構建含有UHRF1 3'UTR全長的野生型(pmiR-RB-UHRF1-3'UTR-wt)和突變型熒光素酶報告質(zhì)粒(pmiR-RB-UHRF1-3'UTR-mut),分別將pmiR-RB-UHRF1-3'UTR-wt,pmiR-RB-UHRF1-3'UTRmut,pmiR-RB-REPORT vector與let-7amimics或mimics control共轉染293T細胞,雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測轉染后293T細胞的熒光素酶表達水平.293T細胞分別轉染let-7amimics和inhibitor,western blot和real-time RT PCR檢測UHRF1基因的表達.結果:生物信息學結果顯示let-7a有48個預測靶基因,包括UHRF1,HMGA2,MAPK6等,主要涉及microRNA在腫瘤、細胞周期、PI3K-AKT、p53等信號通路.其中UHRF1 3'UTR含有一個let-7a的結合位點,且在多個物種中呈高度保守.進一步雙熒光素酶檢測發(fā)現(xiàn),共轉染let-7amimics和pmiR-RBUHRF1-3'UTR-wt的293T細胞熒光素酶活性顯著降低(p0.01).Western blot和real-time RT PCR結果顯示轉染let-7amimics的293T細胞UHRF1表達降低,而轉染let-7ainhibitor的293T細胞UHRF1表達增高.結論:人腎上皮細胞293T中l(wèi)et-7a能通過與UHRF13'UTR靶向結合,負性調(diào)控UHRF1的表達.
[Abstract]:Aim: to investigate the negative regulation of let-7a on target gene UHRF1 in human renal epithelial cell line 293T. Methods: let-7a target gene was predicted and analyzed by bioinformatics. Wild type (pmiR-RB-UHRF1-3UUTR-wt) and mutant luciferase reporter plasmid (pmiR-RB-UHRF1-3UUTR-mut) were constructed, respectively, and pmiR-RB-UHRF1-3 UTR-wtpmiR-RB-UHRF1-3UTRPORT vector was cotransfected with let-7amimics or mimics control into 293T cells. The expression of luciferase in 293T cells was detected by double luciferase report system. The expression of UHRF1 gene was detected by real-time RT PCR and let-7amimics transfected with 293T cells. Results: bioinformatics showed that let-7a had 48 predictive target genes, including UHRF1, HMGA2mMAPK6, which were mainly involved in the signaling pathways of microRNAs in tumor, cell cycle, PI3K-AKTP-p53 and so on. UHRF1 3 UTR contains a let-7a binding site and is highly conserved in multiple species. Further double luciferase assay showed that luciferase activity of 293T cells co-transfected with let-7amimics and pmiR-RBUHRF1-3UTR-wt decreased significantly (p0.01). Western blot and real-time RT PCR showed that UHRF1 expression in 293T cells transfected with let-7amimics was decreased, but UHRF1 expression in 293T cells transfected with let-7ainhibitor was increased. Conclusion: let-7a can negatively regulate the expression of UHRF1 by targeting with UHRF13 UTR in human renal epithelial cell line 293T.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學細胞生物學及遺傳學教研室;重慶醫(yī)科大學生物信息學教研室;重慶醫(yī)科大學實驗教學中心;
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81270912) 重慶市科委一般項目(cstc2013jcyjA10044)
【分類號】：Q78

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 楊穎;張逢春;;熒光素酶的分類、結構與應用[J];北華大學學報(自然科學版);2006年05期

2 張逢春,羅速;發(fā)光桿菌熒光素酶的提取[J];北華大學學報(自然科學版);2001年02期

3 張逢春,楊蜜;生物熒光素酶的活性與固相化[J];北華大學學報(自然科學版);2001年03期

4 劉建武,孫成華,劉寧;熒光素酶及其應用[J];生物學通報;2004年02期

5 耿德玉;原媛;郭華榮;;雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)的應用研究進展[J];科技資訊;2012年21期

6 李建華;李春艷;靳天輝;王云華;;熒光素酶報告基因在科研中的應用[J];大家健康(學術版);2013年08期

7 俎聰;李明;魯曉東;王靜雪;;鰒發(fā)光桿菌熒光素酶的提取、分離與純化[J];食品工業(yè)科技;2013年12期

8 王釗;;熒光素研制成功[J];生物科學信息;1989年01期

9 戎晶晶;陳之遙;周國華;;生物素化熒光素酶的克隆表達及其固定化研究[J];中國生物工程雜志;2007年09期

10 朱術會;鄒秉杰;武海萍;馬寅姣;陳穎;周國華;;熱穩(wěn)定生物素化熒光素酶的制備及其在焦測序中的應用[J];分析化學;2010年04期

相關會議論文 前6條

1 許豐雯;徐丹;王明曉;陳啟民;耿運琪;喬文濤;;以熒光素酶為報告基因定量檢測原型泡沫病毒的指示細胞系的建立[A];2010年第四屆全國微生物遺傳學學術研討會論文摘要集[C];2010年

2 劉亞寧;劉成剛;趙新華;朱美財;陳濤;;利用生物發(fā)光測定PBP對熒光素酶復性的促進作用[A];第九次全國生物物理大會學術會議論文摘要集[C];2002年

3 李風云;余軍平;張治平;崔宗強;王殿冰;危宏平;張先恩;;溶液增強Gaussia熒光素酶的BRET傳感器檢測蛋白酶[A];中國化學會第28屆學術年會第4分會場摘要集[C];2012年

4 梁紅茹;譚業(yè)平;頓燦;郭霄峰;;熒光素酶標記狂犬病毒rHEP-luc株的生物學特性研究[A];2010全國狂犬病防控高層論壇論文集[C];2010年

5 朱曉宇;桑建利;;G1期cyclin和CDK對pold1基因啟動子活性的調(diào)控作用[A];中國細胞生物學學會2005年學術大會、青年學術研討會論文摘要集[C];2005年

6 陳靜;葉平;劉永學;;亞油酸對1型纖溶酶原激活物抑制劑表達的影響及其機制[A];中華醫(yī)學會心血管病學分會第八次全國心血管病學術會議匯編[C];2006年

相關重要報紙文章 前1條

1 記者 符王潤 通訊員 習文江;螢火蟲提取物實現(xiàn)快速檢驗微生物[N];廣東科技報;2008年

相關博士學位論文 前8條

1 饒林;特異性靶向IRES的抗丙型肝炎病毒核酸藥物及影響IRES功能的因素研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2004年

2 張靜;神經(jīng)元限制性沉默因子對CART基因轉錄的調(diào)控作用及其機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2011年

3 姜軼群;利用海腎熒光素酶雙分子互補技術研究Hsp90/Cdc37相互作用[D];吉林大學;2010年

4 龔鳳英;細胞因子對垂體人生長激素基因表達的調(diào)節(jié)及其機理的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2003年

5 高博;熒光素酶標記的HCV細胞模型的建立及其在藥物評價等方面的應用[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2011年

6 趙榮蘭;新發(fā)現(xiàn)甲狀腺激素受體β亞型的研究[D];天津醫(yī)科大學;2011年

7 楊儉;白介素-6對人肝臟藥物代謝酶（HCE1、HCE2、CYP3A4）表達的影響及分子機制[D];南京醫(yī)科大學;2008年

8 趙理;多巴胺受體DRD1 mRNA 3' UTR在DRD1轉錄后水平表達調(diào)控中的作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2009年

相關碩士學位論文 前10條

1 張熠;MiR-106b在ATD致粒細胞缺乏發(fā)生中的作用及機制[D];南華大學;2015年

2 溫曉梨;調(diào)控DUSP1(MKP-1)基因表達的特異性RNA結合蛋白及microRNA的篩選[D];南方醫(yī)科大學;2013年

3 于浩然;理性設計改造熒光素酶的熱穩(wěn)定性[D];天津大學;2014年

4 柴繼田;基于豬CCR1和CCR5受體高通量細胞篩選模型的構建及其條件優(yōu)化[D];揚州大學;2015年

5 張坤;利用熒光素酶片段互補技術構建REGγ與α7相互作用抑制劑篩選系統(tǒng)[D];華東師范大學;2016年

6 劉艷杰;重組螢火蟲熒光素酶及其穩(wěn)定性研究[D];天津大學;2010年

7 夏蕾;重組大腸桿菌表達熒光素酶的研究[D];江南大學;2008年

8 梅冊霞;細菌熒光素酶體外發(fā)光體系的研究及在水產(chǎn)品致病菌檢測中的應用[D];中國海洋大學;2010年

9 王慶培;熒光素酶生物發(fā)光法快速評價消毒效果的初步研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2006年

10 李雪瑩;用于活體成像技術的表達熒光素酶人肝癌細胞系的建立及驗證[D];天津醫(yī)科大學;2012年

，

本文編號：2114372