發(fā)布時(shí)間：2018-07-08 19:12

  本文選題：惡性瘧原蟲 + PfKelch13基因��； 參考：《大理大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：【研究目的】了解云南省惡性瘧原蟲分離株P(guān)fKelch13基因多態(tài)及其分子流行病學(xué)特征;對(duì)惡性瘧原蟲分離株的PfKelch13基因突變與青蒿素耐藥性間的關(guān)聯(lián)程度進(jìn)行間接評(píng)估,為云南省惡性瘧原蟲青蒿素耐藥性分子監(jiān)測標(biāo)志提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。【研究方法】(1)收集2013年1月-2015年12月,經(jīng)確診的云南省惡性瘧疾報(bào)告病例血樣202份,2009年1月-2012年12月經(jīng)確診的緬甸籍惡性瘧疾病例血樣384份;青蒿琥酯耐藥性體內(nèi)受試對(duì)象為:年齡2~60歲、2周內(nèi)無抗菌藥服藥史或/和抗瘧藥史的緬甸籍惡性瘧疾病例,接受青蒿琥酯耐藥性體內(nèi)測試。(2)參照QIAamp DNA Mini Kit瘧原蟲DNA提取試劑盒說明書,提取瘧原蟲基因組DNA,巢氏PCR擴(kuò)增PfKelch13基因kelch結(jié)構(gòu)域,對(duì)測序基因片段的單倍型及期望雜合度(He)、基因多態(tài)系數(shù)(H)和群體間遺傳分化指數(shù)(Fst)進(jìn)行分析;構(gòu)建PfKelch13基因kelch結(jié)構(gòu)域單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖,對(duì)云南省及緬甸籍病例惡性瘧原蟲分離株類群間的遺傳背景進(jìn)行分析。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析惡性瘧原蟲分離株P(guān)fKelch13基因kelch結(jié)構(gòu)域突變型與青蒿素治療失敗之間的關(guān)聯(lián)性。(4)參照QIAamp DNA Mini Kit瘧原蟲DNA提取試劑盒說明書提取瘧原蟲基因組DNA,PCR擴(kuò)增Pfhrp2基因的exon2區(qū),并進(jìn)一步對(duì)PCR擴(kuò)增出的陽性產(chǎn)物進(jìn)行測序;對(duì)測序基因片段的單倍型及期望雜合度(He)、基因多態(tài)系數(shù)(H)和群體間遺傳分化指數(shù)(Fst)進(jìn)行分析,構(gòu)建Pfhrp2基因exon2區(qū)單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖,對(duì)云南省及緬甸籍惡性瘧原蟲分離株P(guān)fhrp2基因exon2區(qū)類群間的遺傳背景進(jìn)行分析。【結(jié)果】(1)本研究中云南省瘧疾報(bào)告病例PfKelch13基因kelech結(jié)構(gòu)域DNA序列中,單倍型共有13種,He為0.0481,錯(cuò)義突變序列占34.7%(66/190),在16、446和676等10個(gè)位點(diǎn)發(fā)生單位點(diǎn)突變,F446I的突變率最高,為25.3%(48/190);緬甸籍病例PfKelch13基因kelech結(jié)構(gòu)域DNA序列中,單倍型共有19種,He為0.0440,錯(cuò)義突變序列占58.8%(114/194),在446、76和492等12個(gè)位點(diǎn)發(fā)生單位點(diǎn)突變,F446I的突變率最高,為43.3%(84/194)。(2)本研究中云南及緬甸籍病例PfKelch13基因kelech結(jié)構(gòu)域的遺傳分化指數(shù)Fst=0.0410(P0.05),群體內(nèi)、群體間的變異分別占95.90%和4.10%,且各類群內(nèi)的單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖均顯示“星狀”布局。(3)研究中,以緬甸籍病例推算的青蒿素耐藥性與PfKelch13基因kelech結(jié)構(gòu)域446位點(diǎn)突變的OR值為1.640(95%CI:1.284~2.095)、與PfKelch13基因kelech結(jié)構(gòu)域12種位點(diǎn)突變的OR值為1.840(95%CI:1.412~2.398)。(4)本研究中云南瘧疾報(bào)告病例與緬甸籍病例Pfhrp2基因exon2區(qū)的遺傳分化指數(shù)Fst=0.0047(P0.05),兩類群間遺傳變異微弱、幾乎無分化,且兩類群內(nèi)的單倍型中介網(wǎng)絡(luò)圖并未顯示出明顯的地理域聚類分支。【結(jié)論】(1)云南省瘧疾報(bào)告病例與緬甸籍病例惡性瘧原蟲PfKelch13基因kelch結(jié)構(gòu)域具有多態(tài)性。(2)云南省瘧疾報(bào)告病例與緬甸籍病例的惡性瘧原蟲分離株類群在PfKelch13基因kelch結(jié)構(gòu)域上的分化程度低,具有相似的遺傳背景。(3)以緬甸籍病例推算的青蒿素耐藥性產(chǎn)生與PfKelch13基因kelech結(jié)構(gòu)域446位點(diǎn)突變的OR值為1.640(95%CI:1.284~2.095)、與12種位點(diǎn)突變的OR值為1.840(95%CI:1.412~2.398),以緬甸籍病例分離株推算出的PfKelch13基因突變與青蒿素耐藥性產(chǎn)生的遺傳關(guān)聯(lián)程度適用于云南報(bào)告病例的惡性瘧原蟲類群。(4)云南省瘧疾報(bào)告病例與緬甸籍病例的惡性瘧原蟲分離株類群在Pfhrp2基因exon2區(qū)的分化程度低,具有相似的遺傳背景。
[Abstract]:Objective To investigate the polymorphism and molecular epidemiology of Plasmodium falciparum isolates in Yunnan Province , and to analyze the genetic background of Plasmodium falciparum isolates from January 2013 to December 2015 . ( 2 ) To construct the single - fold medium network map of Plasmodium falciparum isolates from January 2013 to December 2012 . ( 2 ) In this study , the genetic differentiation index Fst = 0.0410 ( P0.05 ) , and the genetic differentiation index Fst = 0.0047 ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R531.3

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本文編號(hào)：2108475