本文選題：羅非魚 + PXR基因��； 參考：《南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2017年12期

【摘要】：【目的】克隆尼羅羅非魚P2X4R基因,并構(gòu)建原核表達(dá)載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),為深入研究P2X4R在魚類中的生物學(xué)功能打下基礎(chǔ)�！痉椒ā坷肞CR克隆尼羅羅非魚P2X4R基因的3個(gè)片段(G1、G2和G3),拼接獲得目的基因后連接pCold Ⅱ載體構(gòu)建pCold Ⅱ-P2X4R重組質(zhì)粒,再轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,以IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。分別采用SDS-PAGE和Western blotting檢測(cè)分析重組蛋白P2X4R的表達(dá)情況,并運(yùn)用生物信息學(xué)在線分析軟件對(duì)其理化性質(zhì)、糖基化位點(diǎn)、跨膜區(qū)域、亞細(xì)胞定位及信號(hào)肽等進(jìn)行預(yù)測(cè)分析�！窘Y(jié)果】克隆獲得的尼羅羅非魚P2X4R基因大小為1108 bp,與pCold Ⅱ載體重組后轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞獲得的原核表達(dá)載體經(jīng)IPTG誘導(dǎo)可表達(dá)獲得目的蛋白,在IPTG 1.0 mmol/L、37℃誘導(dǎo)4 h的條件下重組蛋白表達(dá)量高于在IPTG 0.1 mmol/L、16℃過(guò)夜誘導(dǎo)的表達(dá)量。重組蛋白P2X4R的分子量約43.0 k D,其氨基酸數(shù)量為354個(gè),理論等電點(diǎn)(pI)為6.78,不穩(wěn)定指數(shù)為37.62,屬于穩(wěn)定蛋白,脂肪族指數(shù)為74.35;重組蛋白P2X4R具有3個(gè)N-糖基化位點(diǎn)和1個(gè)O-糖基位點(diǎn);該蛋白未見跨膜區(qū),其蛋白幾乎100%位于細(xì)胞膜內(nèi),不含信號(hào)肽。【結(jié)論】誘導(dǎo)表達(dá)獲得的尼羅羅非魚P2X4R蛋白具有3個(gè)N-糖基化位點(diǎn)和1個(gè)O-糖基化位點(diǎn),推測(cè)其存在糖基化現(xiàn)象,可制備相應(yīng)抗體用于揭示羅非魚巨噬細(xì)胞的抗原呈遞作用機(jī)制。
[Abstract]:[objective] to clone P2X4R gene of Tilapia niloticus and construct a prokaryotic expression vector to induce expression. [methods] three fragments of P2X4R gene of tilapia niloticus (G1G 2 and G3) were cloned by PCR and ligated with pCold 鈪，

本文編號(hào)：2098006