本文選題：羅非魚 + PXR基因��； 參考：《南方農業(yè)學報》2017年12期

【摘要】：【目的】克隆尼羅羅非魚P2X4R基因,并構建原核表達載體進行誘導表達,為深入研究P2X4R在魚類中的生物學功能打下基礎�！痉椒ā坷肞CR克隆尼羅羅非魚P2X4R基因的3個片段(G1、G2和G3),拼接獲得目的基因后連接pCold Ⅱ載體構建pCold Ⅱ-P2X4R重組質粒,再轉化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞,以IPTG進行誘導表達。分別采用SDS-PAGE和Western blotting檢測分析重組蛋白P2X4R的表達情況,并運用生物信息學在線分析軟件對其理化性質、糖基化位點、跨膜區(qū)域、亞細胞定位及信號肽等進行預測分析�！窘Y果】克隆獲得的尼羅羅非魚P2X4R基因大小為1108 bp,與pCold Ⅱ載體重組后轉化BL21(DE3)感受態(tài)細胞獲得的原核表達載體經IPTG誘導可表達獲得目的蛋白,在IPTG 1.0 mmol/L、37℃誘導4 h的條件下重組蛋白表達量高于在IPTG 0.1 mmol/L、16℃過夜誘導的表達量。重組蛋白P2X4R的分子量約43.0 k D,其氨基酸數量為354個,理論等電點(pI)為6.78,不穩(wěn)定指數為37.62,屬于穩(wěn)定蛋白,脂肪族指數為74.35;重組蛋白P2X4R具有3個N-糖基化位點和1個O-糖基位點;該蛋白未見跨膜區(qū),其蛋白幾乎100%位于細胞膜內,不含信號肽�！窘Y論】誘導表達獲得的尼羅羅非魚P2X4R蛋白具有3個N-糖基化位點和1個O-糖基化位點,推測其存在糖基化現象,可制備相應抗體用于揭示羅非魚巨噬細胞的抗原呈遞作用機制。
[Abstract]:[objective] to clone P2X4R gene of Tilapia niloticus and construct a prokaryotic expression vector to induce expression. [methods] three fragments of P2X4R gene of tilapia niloticus (G1G 2 and G3) were cloned by PCR and ligated with pCold 鈪，

本文編號：2098006