發(fā)布時間：2018-07-02 23:15

  本文選題：蛋白質(zhì)復(fù)合物 + 次生代謝物��； 參考：《中國中藥雜志》2017年20期

【摘要】：蛋白質(zhì)復(fù)合物參與植物多種次生代謝物的合成,其分離對闡明植物次生代謝及提高體外催化效率至關(guān)重要。該研究構(gòu)建了過表達(dá)丹參酮合成途徑關(guān)鍵酶CYP76AH1的轉(zhuǎn)基因毛狀根株系,通過Western雜交篩選得到高表達(dá)CYP76AH1蛋白的丹參轉(zhuǎn)基因毛狀根,并以此作為后續(xù)提取丹參酮合成途徑中蛋白質(zhì)復(fù)合物的組培材料。通過優(yōu)化蛋白提取緩沖液中的去污劑種類和濃度,篩選出含0.5%Triton X-100的緩沖液為最佳提取緩沖液,并分離得到相對大量的可溶性CYP76AH1蛋白質(zhì)。該研究為后續(xù)進(jìn)一步分離純化與CYP76AH1相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合物奠定了基礎(chǔ),也為深度解析丹參酮合成代謝通路提供思路。
[Abstract]:Protein complexes are involved in the synthesis of many secondary metabolites in plants. The separation of protein complexes is very important to clarify the secondary metabolism of plants and improve their catalytic efficiency in vitro. In this study, transgenic hairy root lines expressing the key enzyme CYP76AH1 of tanshinone biosynthesis pathway were constructed, and the transgenic hairy roots of Salvia miltiorrhiza with high expression of CYP76AH1 protein were obtained by Western blot. It was used as a tissue culture material for the subsequent extraction of protein complexes from tanshinone synthesis pathway. By optimizing the type and concentration of detergent in protein extraction buffer, the buffer containing 0.5 Triton X-100 was selected as the optimal extraction buffer, and a relatively large amount of soluble CYP76AH1 protein was isolated. This study laid a foundation for the further separation and purification of protein complexes interacting with CYP76AH1, and provided a way for deep analysis of the metabolic pathway of tanshinone biosynthesis.
【作者單位】： 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心道地藥材國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;北京中醫(yī)藥大學(xué);
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZZ2016026) 中央本級重大增減支項(xiàng)目(2060302)
【分類號】：S567.53

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本文編號：2091286