發(fā)布時(shí)間：2018-07-01 16:54

  本文選題：DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 + 慢病毒��； 參考：《臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》2016年23期

【摘要】：目的構(gòu)建干擾DNMT1基因的慢病毒并感染結(jié)腸癌SW620細(xì)胞株,觀察其對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法合成DNMT1 shRNA寡核苷酸鏈,與p CDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP連接構(gòu)建重組慢病毒質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞進(jìn)行病毒包裝。包裝后的病毒感染SW620細(xì)胞,分為3組:Lentivirus-DNMT1組(LV-DNMT1)、Lentivirus-vector組(LV-vector)、空白對(duì)照組(Blank)。采用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè)細(xì)胞DNMT1及T-cadherin表達(dá),MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡,Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲和遷移。結(jié)果成功構(gòu)建了靶向干擾DNMT1的慢病毒載體。與LV-vector組和Blank組比較,LV-DNMT1組DNMT1 mRNA(0.49±0.09)和蛋白(0.39±0.11)表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05),而T-cadherin mRNA(0.74±0.12)和蛋白(0.69±0.13)表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)。與LV-vector組和Blank組比較,LV-DNMT1組第12 h、24 h、36 h、48 h、72 h時(shí)的OD(570)值降低(P0.05),細(xì)胞總凋亡率(26.06%)增加(P0.05),穿膜細(xì)胞數(shù)目[(21.33±8.02)個(gè)]和細(xì)胞遷移距離[(303.27±47.58)μm]減少(P0.05)。結(jié)論 DNMT1慢病毒載體可有效敲減DNMT1表達(dá)和上調(diào)T-cadherin表達(dá),抑制SW620細(xì)胞增殖,促進(jìn)其凋亡,降低其侵襲、遷移能力。
[Abstract]:Aim to construct a lentivirus interfering with DNMT1 gene and infect colon cancer cell line SW620, and to observe its effect on cell biological behavior. Methods DNMT1 shRNA oligonucleotide chain was synthesized and ligated with pCDH-CMV-MCS-EF1-cop GFP to construct a recombinant lentivirus plasmid. The recombinant plasmid was transfected into HEK293T cells for viral packaging. The infected SW620 cells were divided into three groups: LV-DNMT1 group (LV-DNMT1) and blank control group (Blank). The expression of DNMT1 and T-cadherin was detected by quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot. MTT assay was used to detect cell proliferation and apoptosis, and cell invasion and migration were detected by cell scratch assay. Results Lentivirus vector targeting DNMT1 was successfully constructed. Compared with LV-vector group and Blank group, the expression of DNMT1 mRNA and protein in LV-DNMT1 group (0.49 鹵0.09) and protein (0.39 鹵0.11) were significantly down-regulated (P0.05), while T-cadherin mRNA (0.74 鹵0.12) and protein (0.69 鹵0.13) were up-regulated (P0.05). Compared with LV-vector group and Blank group, the OD (570) of LV-DNMT1 group was decreased (P0.05), the total apoptosis rate (26.06%) was increased (P0.05), the number of perforating cells [(21.33 鹵8.02) 渭 m] and the cell migration distance [(303.27 鹵47.58) 渭 m] were decreased (P0.05). Conclusion DNMT1 lentivirus vector can effectively knock down the expression of DNMT1 and up-regulate the expression of T-cadherin, inhibit the proliferation of SW620 cells, promote its apoptosis, reduce its invasion and migration ability.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院普外科上海市微創(chuàng)外科臨床醫(yī)學(xué)中心;
【分類號(hào)】：R735.35

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本文編號(hào)：2088436