本文選題：雞 + 恒定鏈　； 參考：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex,MHC)是由一群位于脊椎動物特定染色體區(qū)域基因所編碼的高度多態(tài)性蛋白分子。MHC分子分布于不同細(xì)胞表面,參與抗原呈遞和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。不同種類動物MHC及其編碼產(chǎn)物的名稱各異。MHC分子家族中的Ⅱ類分子是由α、β兩條鏈組成的異二聚體。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中它與的γ鏈聚合,形成九聚體。九聚體中的γ鏈不同于α和β鏈,呈非多態(tài)性,因此被稱為恒定鏈(Invariant chain,Ii)。Ii是一種Ⅱ型跨膜糖蛋白,白細(xì)胞分化抗原編號為CD74。作為MHC Ⅱ分子的重要伴侶蛋白分子,Ii輔助MHC Ⅱ分子的正確折疊、組裝、結(jié)構(gòu)維持和協(xié)助呈遞外源性抗原肽。在與MHC Ⅱ分子的α、β鏈形成九聚體的過程中,其CLIP區(qū)(the class-Ⅱ associated Ii chain peptide)占據(jù)MHC Ⅱ類分子的抗原結(jié)合槽,阻止內(nèi)源性抗原肽與MHC Ⅱ類分子結(jié)合。Ii與MHC分子的相互作用主要通過原核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行研究。由于在這兩個分子間關(guān)系中,需要檢測分子間親和力關(guān)系,但是現(xiàn)有的動物真核細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物難以滿足這類實驗。為此,本研究探索應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)大量表達(dá)目的蛋白,以此研究兩種分子間的相互作用。首先,根據(jù)Gen Bank雞B-LB(S66480)基因序列,利用自行設(shè)計的引物,從實驗室保存的各基因cDNA克隆雞B-LBβ1β2編碼區(qū)域,將克隆的基因片段分別插入原核表達(dá)載體p ET-28a,分別用于轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3)表達(dá)蛋白。經(jīng)PCR、酶切鑒定和測序結(jié)果表明成功構(gòu)建3個重組質(zhì)粒。其次,將原核表達(dá)3個融合蛋白His/B-LB-26-209、218、223并鑒定其表達(dá)形式后優(yōu)化其表達(dá)條件后進(jìn)行大量表達(dá)。用反復(fù)凍融和超聲的方法裂解表達(dá)菌,提取融合蛋白,再經(jīng)復(fù)性、純化、透析。在SDS-PAGE電泳中,His/B-LB-26-209蛋白分子量為26.4 kD,His/B-LB-26-218蛋白分子量為27.4 kD,His/B-LB-26-223蛋白分子量為28.0 kD,與預(yù)期大小一致。用這些蛋白復(fù)性后免疫印跡檢測抗原,結(jié)果表明這些原核表達(dá)產(chǎn)物具有抗原性。最后,用等溫滴定量熱(ITC)檢測原核表達(dá)的B-L和Ii相互作用的解離常數(shù)(Kd),反應(yīng)的焓變和熵變(△H,△S)。結(jié)果表明,B-L與Ii之間是相互作用主要是來自于特異性的靜電引力和氫鍵作用力。上述這些結(jié)果表明,雞B-L基因的原核表達(dá)的產(chǎn)物能夠保持其抗原性,等溫滴定量熱結(jié)果表明原核表達(dá)的Ii和B-L蛋白分子復(fù)性后它們互相結(jié)合并得出親和力的大小。本研究的結(jié)果為進(jìn)一步研究Ii與B-L分子關(guān)系提供方法。
[Abstract]:The main histocompatibility complex (major histocompatibility complexMHC) is a group of highly polymorphic protein molecules. MHC molecules, which are encoded by a group of genes located in specific chromosomal regions of vertebrates, are distributed on different cell surfaces and participate in antigen presentation and regulation of immune response. The names of MHC and its encoded products of different species of animals are different. The class 鈪，

本文編號：2078765